[发明专利]一种基于PMA-qPCR技术的布鲁氏菌活菌计数方法在审
| 申请号： | 201910801583.0 | 申请日： | 2019-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN110343744A | 公开（公告）日： | 2019-10-18 |
| 发明（设计）人： | 任洪林;张士军;胡盼;卢士英;柳增善;王海波;李岩松;柳溪林;张英 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 薛红凡 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于PMA‑qPCR技术的布鲁氏菌活菌计数方法，属于微生物计数技术领域。本发明优化PMA处理布鲁氏菌S2的处理浓度与曝光时间，再结合qPCR方法检测布鲁氏菌BCSP31基因，建立PMA‑qPCR定量检测布鲁氏菌活菌的方法。采用PMA‑qPCR检测布鲁氏菌的灵敏度是普通PCR的100倍，可对布鲁氏菌活菌数进行准确定量，且PMA处理不对qPCR反应造成干扰。用PMA‑qPCR法计数布鲁氏菌活菌数具有快速、简便、特异性较好等特点。与平板技术方法相比，既可以快速完成布鲁氏菌活菌数测定，又可以同时完成布鲁氏菌的定量定性检测。 | ||
| 搜索关键词： | 布鲁氏菌 活菌数 活菌 布鲁氏菌BCSP31基因 定量检测 定性检测 计数技术 平板技术 准确定量 灵敏度 检测 微生物 曝光 优化 | ||
【主权项】：
1.一种基于PMA‑qPCR技术的布鲁氏菌活菌计数方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将样品制成样品悬浮液；2)向所述样品悬浮液中加入PMA使终浓度为15～19μg/mL，曝光处理10～25min，得到PMA处理的样品悬浮液；3)提取所述PMA处理的样品悬浮液中微生物基因组DNA；4)将所述微生物基因组DNA作为模板，针对布鲁氏菌BCSP31基因进行实时荧光定量PCR检测；5)将实时荧光定量PCR检测的CT值代入标准曲线回归方程中，得到样品悬浮液中布鲁氏菌活菌浓度。
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