[发明专利]一种适合肾脏异种移植供体猪的构建方法在审
| 申请号： | 201910498532.5 | 申请日： | 2019-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN110373392A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 魏红江;赵恒;赵红业;角德灵;徐凯祥;郭建雄 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京名华博信知识产权代理有限公司 11453 | 代理人： | 李中强 |
| 地址： | 650201 云南省昆*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适合肾脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术同时敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，在此基础猪上再定点插入hCD39、hTBM、REN三个修饰基因，构建多基因修饰的肾脏异种移植供体猪，再对该供体猪进行功能验证，获得适合肾脏异种移植的供体猪。本发明为适合异种肾脏移植供体猪的开发提供了科学的理论基础，为肾脏衰竭患者的移植治疗提供了希望。 | ||
| 搜索关键词： | 供体猪 异种移植 肾脏 构建 修饰基因 肾脏移植 体细胞核移植技术 猪胎儿成纤维细胞 动物生物技术 个人源化 功能验证 基因修饰 理论基础 移植治疗 多基因 基因 供体 敲除 修饰 开发 | ||
【主权项】：
1.一种适合肾脏异种移植供体猪的构建方法，其特征在于：具体步骤为：1）除引起抗原抗体免疫排斥反应的三个主要抗原基因在猪成纤维细胞系的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术同时敲除能够引起抗原抗体免疫排斥反应的GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个抗原特异基因；2）定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因在前期获得的GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO三基因修饰的基础上，再定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，获得GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰基础供体猪；3）体细胞核移植和胚胎移植利用体细胞核移植技术，将经筛选获得的GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因细胞系进行体细胞核移植，待妊娠时取出胎儿鉴定基因的编辑情况，分离培养获得六基因修饰基础猪胎儿猪成纤维细胞系；4）在此基础猪胎儿成纤维细胞的基础上，再定点插入hCD39、hTBM、REN三个特异修饰基因，构建出多基因修饰的肾脏异种移植供体猪；5）对上述所获得的多基因修饰的肾脏异种移植供体猪进行功能验证，获得适合肾脏异种移植的供体猪。
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