[发明专利]一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法

摘要

本发明公开了一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法，包括以下步骤：将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.05％‑0.1％的抗坏血酸，并加入0.5‑1Kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；在上述滤液中加入0.03％‑0.05％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心10‑15分钟，搅拌速度为4000‑5000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.1‑0.2％，加完单宁后，让其静置；本发明通过菠萝皮渣制备的菠萝蛋白酶酶活力好，纯度高，提高了菠萝皮渣的利用率。

主权项

1.一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将菠萝皮渣洗净，首先放入粉碎过滤装置中进行多级粉碎，然后加入0.05％‑0.1％的抗坏血酸，并加入0.5‑1Kg蒸馏水，最后通过挤压过滤得到滤液；步骤二、在上述滤液中加入0.03％‑0.05％的丙酸钙防腐，将滤液高速搅拌离心10‑15分钟，搅拌速度为4000‑5000r/min，取上清液，并向上清液中加入预先溶解的单宁溶液，边加边搅拌，使单宁的最终浓度为0.1‑0.2％，加完单宁后，让其静置，使所形成的单宁一酶复合物沉淀后，用虹吸法小心去除上清液，得下层复合物浓缩液；并将下层复合物浓缩液进行分离、洗涤制备成酶膏，将酶膏置于12℃以下低温冷冻15‑20小时，然后取出解冻的酶膏，把酶膏倒入装有氯化钙的干燥器中干燥6‑10小时，干燥后再粉碎即可得到粗酶制品；步骤三、将上述粗酶制品溶解于0.4mol/L，pH6.6的柠檬酸缓冲液中，配成蛋白浓度为5.4mg/mL的溶液，并将蛋白溶液以1‑2mL/min的流速流过层析柱，先用蒸馏水4‑6mL洗涤层析柱，然后用0.02mol/L，pH6.6的柠檬酸缓冲液洗涤，最后用0.4mol/L，pH6.6的柠檬酸缓冲液洗脱，流速为0.5‑1mL/min，循环两次后，收集纯化后的菠萝蛋白酶。