[发明专利]利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法在审
| 申请号： | 201910116616.8 | 申请日： | 2019-02-15 |
| 公开（公告）号： | CN109839509A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 张冰洁 | 申请（专利权）人： | 浠思（上海）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，属于潜在激动剂的筛选领域。OX40/OX40L的HTRF结合分析实验筛选潜在激动剂的方法，包括如下步骤：1)配制已构建好的带有不同标签的OX40或OX40L蛋白，待筛选样品用；2)在微孔板中依次加入待筛选样品、OX40及OX40L蛋白，上述两种对应的带标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；3)室温孵育一段时间，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值即为原始数据。本发明提供了新的方法，实现了生化水平上筛选OX40/OX40L潜在激动剂，无需构建细胞，更加直接快捷。 | ||
| 搜索关键词： | 激动剂 筛选 结合分析 实验技术 构建 蛋白 酶标仪读数 标签抗体 生化水平 实验筛选 室温孵育 原始数据 微孔板 荧光 偶联 配制 标签 细胞 检测 | ||
【主权项】：
1.一种利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：S110,配制已构建好的带有不同标签的OX40或OX40L蛋白，待筛选样品用；S120,在微孔板中依次加入待筛选样品、OX40及OX40L蛋白，上述两种对应的带标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；S130,室温孵育一段时间，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值即为原始数据；检测的为HTRF两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光，当665nm/620nm的比值越低，样品的效应越高；其中上述偶联Donor和Acceptor的两种标签抗体分别检测相互作用的蛋白OX40和OX40L，从而形成四个物质聚合的复合物，拉近Donor和Acceptor的距离，能量能够从Donor上转移到Acceptor上，使Acceptor产生荧光；若样品能与OX40蛋白，则随着样品浓度的增加，665nm/620nm的比值降低；待稳定后测定荧光值的变化便可量化样品的效价，上述OX40和OX40L为重组蛋白。
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