[发明专利]一种永生化皮脂腺细胞株的构建方法在审
| 申请号： | 201910013336.4 | 申请日： | 2019-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN109852576A | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 施歌 | 申请（专利权）人： | 施歌 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 李想 |
| 地址： | 524000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于皮脂腺技术领域，公开了一种永生化皮脂腺细胞株的构建方法，包括以下步骤：步骤(1)：分离皮脂腺：切取人的面部皮肤，去除皮下脂肪并剥离表皮层，分离得到皮脂腺；步骤(2)：培养皮脂腺细胞；步骤(3)：病毒培养液的制备：步骤(4)：SV40Tag转染；步骤(5)：步骤(4)中的转染细胞株连续传至50代得稳定转染细胞株，永生化皮脂腺细胞株构建成功。本发明的永生化皮脂腺细胞株的构建方法首次构建中国人永生化皮脂腺细胞株，可为亚洲人痤疮治疗药物筛选提供了理想的细胞模型。 | ||
| 搜索关键词： | 皮脂腺细胞 永生化 构建 皮脂腺 转染细胞株 病毒培养液 面部皮肤 皮下脂肪 细胞模型 药物筛选 痤疮治疗 表皮层 切取 转染 去除 制备 剥离 成功 | ||
【主权项】：
1.一种永生化皮脂腺细胞株的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤(1)：分离皮脂腺：切取人的面部皮肤，去除皮下脂肪并剥离表皮层，分离得到皮脂腺；步骤(2)：培养皮脂腺细胞；步骤(3)：病毒培养液的制备：将含有SV40Tag的细胞株置入细胞培养皿中培养，含有SV40Tag的细胞株的细胞长到95％时收集全部培养液，过滤后，得病毒培养液，在4℃下保存备用；步骤(4)：SV40Tag转染：将第二或第三代的皮脂腺细胞进行培养，待细胞长到80％时，先加入步骤(3)的病毒培养液转染，再先后利用皮脂腺细胞培养液和含200μg/ml G418的皮脂腺细胞培养液培养，得转染细胞株，开始第一次传代，以后每72‑96h传代一次；步骤(5)：步骤(4)中的转染细胞株连续传至50代得稳定转染细胞株，永生化皮脂腺细胞株构建成功。
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