[发明专利]基于单分子力谱探测核酸末端结构的方法

摘要

本发明涉及一种基于单分子力谱探测核酸末端结构的方法，具体是一种用于探测核酸自由末端高级结构的单分子力谱方法，属于生物大分子高级结构的力学精密测量领域。首先通过结合反应将携带修饰基团的待测核酸链锚定于DNA单链引物上，生成分叉引物；其次通过聚合酶链式反应制备携带待测核酸链的DNA以及救生绳DNA片段；再次通过酶切连接生成携带多条待测核酸的救生绳DNA结构物，并将其固定于两个表面之间；最后使用单分子力谱探测待测核酸自由末端形成的高级结构的动态变化。本发明设计的救生绳DNA，主要用于重复、主动、精密和实时测量核酸末端高级结构，拓展了单分子力谱的应用范围。

主权项

1.一种基于单分子力谱探测核酸末端结构的方法，其特征在于包括以下步骤：1）待测核酸链的一端携带能进行结合反应的修饰基团，用于锚定在DNA救生绳上；无修饰的另一端为核酸的自由末端，将形成待探测的结构；DNA引物中间位置的修饰基团与待测核酸链进行结合反应，产物是分叉引物；2）分叉引物经分离纯化后用于聚合酶链式反应；3）救生绳DNA片段为不携带待测核酸链的聚合酶链式反应产物；4）救生绳结构物终产物的制备是将携带待测核酸的聚合酶链式反应产物与救生绳DNA片段相间排列，使用连接酶进行共价连接，位于结构物终产物两端的救生绳片段携带亲和性修饰，用于在探测表面锚定结构物；所述的探测表面是微球表面、玻璃表面、原子力显微镜探针或基底表面；5）单分子力谱对锚定于两个表面之间的救生绳DNA结构物施加外力，探测待测核酸形成的高级结构，收集包含三维空间位置、力和时间的轨迹数据。