[发明专利]一种饮料中索马甜的检测方法

摘要

本发明涉及一种饮料中索马甜的检测方法，特别涉及一种利用超高效液相色谱法和SDS‑PAGE法对饮料中索马甜进行分析的方法；超高效液相色谱法是将饮料进行超滤处理后，选择大孔径的色谱填料作为分离介质，以DAD为检测器，进行液相色谱分析，实现定性定量检测；SDS‑PAGE法采用12.5％的分离胶，以考马斯亮蓝染色，能够实现对索马甜的定性及半定量分析，其灵敏度满足标准限值使用要求，为进一步分析验证提供了途径。本发明的优点在于：本发明提供了饮料中索马甜的分析方法，灵敏度满足对索马甜的限量要求，其中色谱法和电泳法能够相互佐证，实现对样品的确证。

主权项

1.一种饮料中索马甜的检测方法，其特征在于：通过超高效液相色谱法或SDS‑PAGE法对饮料中索马甜进行分析检测，对于样品中的疑似检测结果，通过超高效液相色谱法和SDS‑PAGE法的检测结果进行互相印证，确定样品结果；其中，所述超高效液相色谱法的检测步骤，具体如下：(1)样品处理：将饮料摇匀，取2.5mL或对应质量移入到25mL容量瓶中，用水定容，在4℃下以8000rpm的转速离心10min，取上清液15mL到超滤管中进行超滤处理，轻轻冲洗滤膜，并将截留液定容至3mL，进行色谱分析前用0.45μm滤头过滤；(2)色谱条件：Agilent 1290超高效液相色谱仪；色谱柱:300SB‑C18,RRHD 1.8μm,100mm×2.1mm(i,d)；流动相:乙腈、0.1％三氟乙酸水溶液；流速:0.3mL/min；进样量:20μL；柱温:25℃。梯度洗脱:0‑3min，乙腈10％‑0.1％三氟乙酸水溶液90％；3‑15min，乙腈(10％‑100％)，0.1％三氟乙酸水溶液(90％‑0％)；15.1‑20min,乙腈(100％)；20.1‑25min,乙腈10％‑0.1％三氟乙酸水溶液90％；检测器：DAD,检测波长278.2nm，同时进行190‑400nm波长扫描；(3)标准曲线的制作：将索马甜分别用水稀释到浓度为10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L系列标准溶液，进行分析测定，以278.2nm下色谱峰面积与相应浓度绘制标准曲线，获得标准曲线回归方程；(4)样品测定：将处理后的待测样品按照上述(2)所述色谱条件进行分析，以保留时间定性，或借助光谱图进行辅助定性；并根据待测样品278.2nm下峰面积和样品稀释因子计算其含量；(5)检出限和定量限：将不含索马甜的饮料稀释10倍，加入索马甜标准溶液，使其浓度在10mg/L，按照(1)所述方法进行超滤处理，重复测定20次，以结果标准偏差的3倍计算出方法的检出限，以结果标准偏差的l0倍计算出定量限；(6)回收率和精密度：分别向不同类型饮料样品中添加25mg/L、50mg/L、250mg/L不同浓度的索马甜，每个加标样品按照所建立的方法重复测定6次，计算回收率和精密度；所述SDS‑PAGE法的检测步骤，具体如下：(1)电泳条件：分离胶浓度12.0％，上样量60μL，电泳条件135V、50min，考马斯亮蓝染色，脱色液脱色；使用蛋白标样作为参照，蛋白标样分子量覆盖20kD～24kD的区间；(2)样品处理：分别取一定体积的索马甜标准溶液，按体积比1:5的比例加入5X蛋白上样缓冲液，沸水热处理3～5min；(3)将索马甜标准品用水稀释到浓度为10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L、1000mg/L系列标准溶液，分别取一定体积的索马甜标准溶液和待测样品，按上述(2)进行处理，按(1)进行SDS‑PAGE分析；(4)通过比较索马甜标准溶液及待测样品中SDS‑PAGE图上条带大小、深浅，判定待测样品中索马甜含量范围。