[发明专利]一种高产油脂莱茵衣藻的诱变育种方法

摘要

本发明公开了一种高产油脂莱茵衣藻的诱变育种方法，包括样品培养、诱变剂处理、高压诱变、稀释培养、尼罗红染色筛选以及传代培养六大步骤；本发明通过化学诱变和物理诱变相结合得到的诱变莱茵衣藻不仅油脂含量高于现有技术，与有诱变前莱茵衣藻相比油脂含量平均提高86.7％，而且经过三代以上的传代培养发现其稳定性高。另外，本发明诱变的方法简单，诱变条件容易实现，极大降低了诱变育苗的成本，实用性更强。

主权项

1.一种高产油脂莱茵衣藻的诱变育种方法，其特征在于，包括以下步骤：1)样品培养：将莱茵衣藻接种于液体培养基中，活化培养20‑32h，使培养基中的莱茵衣藻的浓度范围在12000‑20000cfu/ml；2)诱变剂处理：用试管取用5ml的活化后莱茵衣藻，向试管中加入诱变剂后用玻璃棒搅拌20s，然后置于温室培养10min；3)高压诱变：将经过诱变剂处理后的莱茵衣藻利用高压进行诱变，其诱变压力为350‑500MPa，诱变时间为1‑3h；4)稀释培养：将高压诱变后的莱茵衣藻放入烧杯中利用生理盐水进行10倍体积的稀释，然后将稀释后的莱茵衣藻均匀涂布于普通固体培养基中，培养5‑7天；5)尼罗红染色筛选：将上述固体培养基中的琼脂切成1mm薄片，并用尼罗红染色液染色15‑20min，再将诱染色后的琼脂片置于显微镜上观察，用接种针挑取琼脂片中油脂体积较大且数目较多的突变藻株；6)传代培养：取步骤5中得到的突变藻株，放入液体培养基中活化培养并稀释，再放入固体培养基中进行传代培养得到高产油脂莱茵衣藻。