[发明专利]一种烟草抗病毒调控基因筛选方法及应用在审
| 申请号： | 201811340502.3 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109610009A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 任学良;蔡新忠;郭玉双;王仁刚;耿召良 | 申请（专利权）人： | 贵州省烟草科学研究院 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6806;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82;C12Q1/70;C12Q1/18 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 550081 贵州*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种烟草抗病毒调控基因筛选方法及应用，该方法首先以病毒诱导的基因沉默VIGS载体为目的载体，构建烟草cDNA文库，进行均一化处理后获取可直接用于基因沉默筛选分析的VIGS‑cDNA文库；将VIGS‑cDNA文库质粒转化至农杆菌，获得农杆菌文库；将农杆菌文库涂板培养获取单菌落，对每个单菌落分别进行VIGS沉默分析，筛选获得抗病毒相关菌落；对筛选获得的抗病毒相关菌落对应的基因进行测序分析，并对获得的序列进行同源性分析和功能预测，获取抗病毒调控基因。本发明方法操作简便，无需构建转基因植株或突变体，耗时短，筛选全面效率高，特别适用于突变致死基因的筛选，应用前景广阔。 | ||
| 搜索关键词： | 抗病毒 筛选 调控基因 农杆菌 基因沉默 烟草 单菌落 菌落 构建 文库 应用前景广阔 均一化处理 同源性分析 转基因植株 病毒诱导 测序分析 功能预测 涂板培养 致死基因 质粒转化 突变体 突变 应用 耗时 分析 基因 | ||
【主权项】：
1.一种烟草抗病毒调控基因筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以VIGS载体为目的载体，构建烟草cDNA文库，进行均一化处理后获取可直接用于基因沉默筛选分析的VIGS‑cDNA文库；(2)cDNA文库‑VIGS分析：将构建完成的VIGS‑cDNA文库质粒转化至农杆菌，获得农杆菌文库，将农杆菌文库涂板培养获取单菌落，对每个单菌落分别进行VIGS沉默分析；(3)抗病毒调控基因的筛选：对cDNA文库各菌落的VIGS沉默植株进行抗病毒分析，筛选获得抗病毒相关菌落；(4)抗病毒调控基因的鉴定：对筛选获得的抗病毒相关菌落对应的基因进行测序分析，并对获得的序列进行同源性分析和功能预测，获取抗病毒调控基因。
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