[发明专利]一种用于马铃薯的苗期耐冻性鉴定方法

摘要

本发明公开了一种用于马铃薯的苗期耐冻性鉴定方法，它包括如下步骤：一、取样用加冰蒸馏水冲洗后放入试管编号；二、将对照试管放入冰中，其余试管放入水浴锅中；三、在水浴锅的慢慢降温进行冷冻；四、将解冻后的叶片切成小条装入试管中，然后加入蒸馏水；五、用真空泵抽气，在振荡器上振动，静置后测电导率R1；六、将试管放入锅中灭菌，冷却后测电导率R2；七、将每个温度对应的3次电解质渗出率的平均值带入方程进行非线性拟合，方程拐点即为材料的半致死温度点即可得出材料的耐冻性。本方法能在较短时间之内快速鉴定马铃薯不同基因型的耐冻性，不受时间和季节的限制，且数据精确可靠，为马铃薯耐冻性研究提供重要依据，取得很好的技术效果。

主权项

1.一种用于马铃薯的苗期耐冻性鉴定方法，其特征在于：它包括如下步骤：一、取成熟叶片用加冰的蒸馏水冲洗后，将叶片放入带盖的试管（25×150mm）底部，每管放一片叶子（共24片），叶面朝下，每管编号；二、将对照试管立即放入冰中，其余试管依次放入水浴锅中（水浴锅中的媒介为1：1的乙二醇和蒸馏水混合物）；三、水浴锅的初始温度设为0℃，保持30min，降到‑0.5℃再保持30min；四、温度从‑0.5℃降到‑1℃并保持1h，‑1℃保持30min时在每管中加入一小块冰，再保持30min后降低到‑1.5℃，‑1.5℃保持1h；五、温度从‑1.5℃降到‑2℃并持续30min后即可取第一次样品，每次取3管；六、温度从‑2℃降到目标温度，保持30min后取样，依次类推，降温直到目标最低温度，并分别取样，将试管取出后插入冰中，于4℃条件下解冻过夜；七、将解冻后的叶片切成5mm的小条装入试管中，然后加入25ml蒸馏水；八、用真空泵以0.1MP的真空度抽气5min，在振荡器上以220转/min的速度振动1h，静置后测电导率R1；九、将试管放入高压灭菌锅中121℃处理20min，冷却至室温后测电导率R2，电解质渗出率（%）=R1/R2×100%；十、将每个温度对应的3次电解质渗出率的平均值带入Logistic方程进行非线性拟合，方程拐点即为材料的半致死温度点（LT50），即可得出材料的耐冻性。