[发明专利]一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法有效
| 申请号： | 201811148051.3 | 申请日： | 2018-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN109136186B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 卢刚;麻育源 | 申请（专利权）人： | 浙江省人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/0793 | 分类号： | C12N5/0793 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 张羽振 |
| 地址： | 310014 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： |
本发明涉及一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法，包括如下步骤：人体颅骨碎块或碎屑作为组织来源提取骨髓间充质干细胞，培养孵化后以10 |
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| 搜索关键词： | 一种 颅骨 间充质 干细胞 来源 神经元 细胞 悬浮 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、人体颅骨碎块或碎屑作为组织来源提取骨髓间充质干细胞，培养孵化后以104～106个/cm2的密度接种至诱导液，诱导液的组成：1×N2、1×B27、30～50ng/ml b‑FGF，溶剂为DMEM/F12基础培养液，在37℃/5％CO2培养箱中分化诱导培养21天，获得神经元样细胞；步骤二、选用成品结冷胶加热至90℃以上配制成1％～3％质量分数比的溶液备用，溶剂为PBS，根据细胞培养接种的密度和诱导分化的要求，在DMEM培养基中添加配制的结冷胶溶液并加入浓度为10mmol/dm3的氯化钙，冷却至30‑35℃即成悬浮凝胶；步骤三、采用电子显微镜或激光共聚焦显微镜观察不同浓度结冷胶溶液配制的悬浮凝胶中网络结构的致密度和孔径的大小，筛选出适合神经元样细胞培养增殖和诱导分化的悬浮凝胶配比浓度和相应的载体构造；步骤四、将选取的神经干细胞移入悬浮凝胶‑DMEM培养基中完成培养增殖。
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