[发明专利]饲料中两种二氢查耳酮含量的同时分离检测方法

摘要

本发明公开了饲料中两种二氢查耳酮含量的同时分离检测方法，所述的两种二氢查耳酮为新橙皮苷二氢查耳酮和柚皮苷二氢查耳酮,方法包括如下步骤：(1)制备混合标准储备液和混合标准工作液；(2)制备待测样品溶液；(3)高效液相色谱分析条件；(4)建立标准工作曲线；(5)结果分析;本方法建立了饲料中新橙皮苷二氢查耳酮（NHDC）和柚皮苷二氢查耳酮（Naringin DC）的固相萃取‑高效液相色谱法。

主权项

1.饲料中两种二氢查耳酮含量的同时分离检测方法，其特征在于, 所述的两种二氢查耳酮为新橙皮苷二氢查耳酮和柚皮苷二氢查耳酮；所述的检测方法包括：（1）制备混合标准储备液和混合标准工作液，所述混合标准储备液均为980 mg/L的混标储备液，混合标准工作液为将二氢查耳酮的标准储备液采用逐级稀释法用50%甲醇溶液配制浓度为0.196 mg/L、0.490 mg/L、0.980 mg/L、4.90 mg/L、9.80 mg/L、49.0 mg/L的系列标准工作溶液；（2）制备待测样品溶液：饲料样品加入70 mL甲醇溶液，置于超声波振荡器中超声萃取30 min，转移至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线并混匀;提取液于10000 r/min下离心3 min，取上清液10 mL于50 mL鸡心瓶中，旋转蒸发仪上于40 ℃下旋至近干，用2 mL 50%甲醇溶液分两次涡旋溶解后转移至50 mL离心管中，加入8 mL纯水，于10000 r/min下离心3 min，过HLB固相萃取小柱净化;净化液氮吹至0.5 mL，加入50%甲醇溶液定容至1.0 mL，混匀，以尼龙66有机滤膜过滤，滤液供分析用;（3）所用仪器为高效液相色谱仪，检测器为光电二极管阵列检测器,色谱柱为反相C18柱，柱温为35±1 ℃，检测波长282nm;流动相A为甲醇，流动相B为纯水；洗脱梯度程序:0 ～ 15.0 min，43% A；15.0 ～ 15.5 min，43% ～ 90% A；15.5 ～ 20.0 min，90% A；20.0 ～ 20.5 min，90% ～ 43% A；20.5 ～ 25.0 min，43% A;流速1.0 mL / min；进样量25 μL。（4）标准曲线的绘制：将两种二氢查耳酮类甜味剂的系列混合标准工作溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线;（5）结果分析：取（2）中滤液注入高效液相色谱仪中，在步骤（3）的色谱条件下进行梯度洗脱和检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据（4）中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中各新橙皮苷二氢查耳酮和柚皮苷二氢查耳酮的含量。