[发明专利]一种洛克沙胂和硝苯胂酸双联检测试纸

摘要

本发明公开了一种洛克沙胂和硝苯胂酸双联检测试纸，该试纸包括抗洛克沙胂的单克隆抗体以及抗硝苯胂酸的单克隆抗体，能够同时检测洛克沙胂和硝苯胂酸。本发明在抗体制备时，分别采用洛克沙胂(ROX)、硝苯胂酸(NIT)作为半抗原，将其硝基还原后改造成氨基，进而与载体蛋白的氨基进行偶联，研制出洛克沙胂、硝苯胂酸人工抗原，该免疫原ROX‑BSA、NIT‑BSA具有更加良好的免疫原性。获得的两种单抗均具备高特异性，高亲和力和高敏感性的优点，为制备洛克沙胂、硝苯胂酸双联检测试纸奠定基础。与现有的高效液相色谱检测技术相比，本发明的免疫层析试纸具有简便、快速、灵敏、准确、高通量等优点，可实现现场实时检测。

主权项

1.一种人工改造洛克沙胂和硝苯胂酸半抗原的方法，其特征在于，以洛克沙胂和硝苯胂酸作为半抗原，对洛克沙胂和硝苯胂酸的硝基进行改造，将硝基还原后改造成氨基，具体方法为：称取13.1g洛克沙胂或硝苯胂酸溶解在100mL浓度为1mol/L的NaOH水溶液中，在冰/水混合物中不断搅拌，冷却至0℃；加入30.25g Na2S2O4搅拌，溶液沸腾，颜色由橙色变至浅黄色时，加入12mL浓HCl，继续保持在0℃，直到发泡停止，产物从溶液中沉淀，过滤后收集沉淀用冰水洗涤两次，得到奶油色固体，即为3‑氨基‑4‑羟基苯胂酸粗产物，真空干燥；将6g粗产物溶于25mL H2O和2mL浓盐酸的混合物中并搅拌15min后过滤，向滤液中加入25％(w/v)乙酸钠溶液直至溶液呈刚果红，将溶液在4℃冷却20min，产生沉淀，过滤后收集沉淀并在真空下干燥，得到纯化的3‑氨基‑4‑羟基苯胂酸晶体或4‑氨基苯胂酸晶体，即改造后的洛克沙胂半抗原或硝苯胂酸半抗原。