[发明专利]一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法在审
| 申请号： | 201810705708.5 | 申请日： | 2018-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN108795940A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 开振鹏;殷玥;陈珊珊 | 申请（专利权）人： | 上海应用技术大学;上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/10;A01N57/16;A01P7/04 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 杨军 |
| 地址： | 200235 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法。该方法通过饲喂的方式将针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA(即dsRNA)导入到幼虫体内，实现防治鳞翅目害虫的目的；本发明方法用于防治鳞翅目害虫，防治特异性强，防治效果持久，安全，对哺乳动物等无害。 | ||
| 搜索关键词： | 防治鳞翅目害虫 鳞翅目害虫 保幼激素 有效防治 甲基转移酶 特异性强 相关基因 哺乳动物 双链RNA 法尼醇 环氧酶 脱氢酶 幼虫 防治 饲喂 体内 安全 | ||
【主权项】：
1.一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法，其特征在于，通过饲喂的方式将针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA导入到幼虫体内，实现防治鳞翅目害虫的目的；其中：法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA的合成步骤如下：(1)提取总RNA，反转录全部mRNA为cDNA，根据已知的鳞翅目害虫的FOLD、JHAMT和CYP15C1基因设计特异性引物，引物均添加T7启动子，PCR扩增特异片段，利用琼脂糖凝胶电泳对引物进行验证；(2)以咽侧体cDNA作为扩增的模板，这些碎片再一次进行克隆放大，dsRNA的合成与纯化采用MEGA script RNAi试剂盒，扩增产物进行消化反应以去除混有的模板DNA和单链RNA；(3)解剖鳞翅目害虫的幼虫，取出咽侧体，进行RNA提取，完成后续反转录步骤，采用q‑RT‑PCR检测表达水平，实现dsRNA的体外培养。
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