[发明专利]高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α-淀粉酶的方法

摘要

本发明涉及一种高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α‑淀粉酶的方法，所述高酶活发酵液的培养方法中，通过优化一级种子培养和发酵培养的培养基配比、调高培养温度、控制溶氧、增加补料工艺，充分满足了菌株生长代谢需要，创造了一个更有利于菌株生长的微环境。最终制备的高酶活发酵液中提取的耐酸α‑淀粉酶的酶活达到75000‑80000U/mL，较一般酶活25000U/mL成倍提高，且耐酸性更好，pH应用范围为4.5‑6，同时大幅降低了发酵原辅材料生产成本，使得该酶的推广应用有了更广阔的空间，具有极大的社会和经济价值。

主权项

1.一种高酶活发酵液的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(S1)斜面培养：将菌株接种至斜面培养基中进行培养，得到生产菌株；(S2)种母液培养：取步骤(S1)所述生产菌株，接种至种母液培养基中进行培养，得到种母液；(S3)一级种子培养：取步骤(S2)所述种母液，接种至一级种子培养基中进行培养，得到一级种子；所述一级种子培养的培养基的原料组分包括：玉米浆干粉12‑20重量份、豆粕18‑25重量份、消泡剂1.5‑3重量份、硫酸镁3‑5重量份、磷酸二氢钾4‑9重量份、磷酸氢二钾30‑50重量份、硫酸亚铁0.015‑0.025重量份、氯化锰0.002‑0.006重量份、氯化锌0.005‑0.008重量份、葡萄糖15‑25重量份、水800‑950重量份；所述一级种子的培养方法，包括如下步骤：将除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次进行调节pH、灭菌、冷却，得到灭菌冷却后的混合料；将葡萄糖灭菌、冷却后，得到灭菌冷却后的葡萄糖；将所述灭菌冷却后的葡萄糖加入所述灭菌冷却后的混合料中，定容，得到灭菌冷却后的一级种子培养的培养基；无菌条件下在所述培养基上接种种母液，经培养后，得到一级种子；(S4)发酵培养：取步骤(S3)所述一级种子，接种至发酵培养基中进行培养，得到高酶活发酵液；所述发酵培养的培养基的原料组分包括：玉米浆干粉10‑25重量份、豆粕12‑18重量份、消泡剂0.6‑1.2重量份、硫酸镁3‑5重量份、磷酸二氢钾5‑9重量份、磷酸氢二钠30‑60重量份、硫酸亚铁0.02‑0.03重量份、氯化锰0.002‑0.005重量份、硫酸锌0.006‑0.008重量份、葡萄糖10‑30重量份、水800‑950重量份；所述发酵培养的方法，包括如下步骤：将除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次进行调节pH、灭菌、冷却，得到灭菌冷却后的混合料；将葡萄糖灭菌、冷却后，得到灭菌冷却后的葡萄糖；将所述灭菌冷却后的葡萄糖加入所述灭菌冷却后的混合料中，定容，得到灭菌冷却后的发酵培养的培养基；无菌条件下在所述灭菌冷却后的发酵培养的培养基上接种一级种子，经培养后，得到初步发酵液；向所述初步发酵液中加入灭菌冷却后的补料，继续培养，即得到所述的高酶活发酵液。