[发明专利]利用类弹性蛋白elp构建活性绵羊β-防御素sbd-1体外表达的方法在审
| 申请号： | 201810364987.3 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108531492A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 曹贵方;王鑫;智达夫;李喜和;刘默凝;李秀男;魏薇;田志鹏;龙鑫;王大清;张福全 | 申请（专利权）人： | 内蒙古农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 赵敬 |
| 地址： | 010018 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用类弹性蛋白elp构建活性绵羊β‑防御素sbd‑1体外表达的方法，属分子生物学领域，是通过 RT‑PCR得到克隆了编码sbd‑1的成熟肽全基因序列，与elp相连后，克隆入原核表达载体pet‑22b中，构成表达载体pet‑22b‑elp‑sbd‑1；利用大肠杆菌偏爱密码子和 Gen Script rare codon analysis 软件获得优化密码子优化的elp‑sbd‑1基因序列并人工合成该基因，将重组载体转化BL21(DE3)大肠杆菌，IPTG诱导融合蛋白表达，利用ITC对其纯化，成功获得绵羊β‑防御素sbd‑1。本发明的优点是：利用类弹性蛋白elp具有温度敏感的可逆相变特性，用离心等简单方法分离纯化，作为重组蛋白的纯化标签,为代替抗生素提供理论基础，对大量生产β‑防御素sbd‑1提供方法依据。 | ||
| 搜索关键词： | 防御素 类弹性蛋白 绵羊 体外表达 构建 大肠杆菌偏爱密码子 克隆 分子生物学领域 原核表达载体 大肠杆菌 全基因序列 优化密码子 表达载体 纯化标签 分离纯化 基因序列 可逆相变 理论基础 融合蛋白 温度敏感 重组蛋白 重组载体 成熟肽 抗生素 基因 转化 优化 成功 | ||
【主权项】：
1.一种利用类弹性蛋白elp构建活性绵羊β‑防御素sbd‑1体外表达的方法，其特征在于：它包括以下步骤：1）、以RT‑PCR的方法获得克隆了sbd‑1的成熟肽全基因序列；2）、克隆入原核表达载体pet‑22b中，构建表达载体pet‑22b‑ elp‑sbd‑1；3）、转化DH5α感受态细胞，提出elp‑sbd‑1蛋白；4）、ITC循环纯化得到sbd‑1目的蛋白；5）、再通过诱导表达、超声破碎、ITC、蛋白纯化、浓缩、抑菌实验，得到绵羊β‑防御素sbd‑1目的蛋白。
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