[发明专利]一种抗病毒蛋白MxA诊断试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种抗病毒蛋白MxA诊断试剂盒及其制备方法，其特征是运用量子点技术、微球技术、中频超声技术、悬浮技术、封闭技术、标记技术，制备了一种MxA诊断试剂盒，适用范围宽、可用于临床、操作简单、精密度高、检测用时较短、灵敏度高、有效期长、成本低廉、作用安全，取得了满意效果。

主权项

1.一种抗病毒蛋白MxA诊断试剂盒，其特征是按如下方法制备：量子点荧光微球混悬液的制备：取4ml浓度为5mg/ml的 CdSe/ZnS量子点甲苯溶液，13000转离心10 分钟，弃去上清液，得沉淀，加入含120mg聚甲基丙烯酸甲酯和80mg聚马来酸酐十八醇酯的三氯甲烷液2ml，加入浓度为3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液5ml，混合10～20分钟，置超声反应器中，选择频率25kHz超声匀质2分钟，得乳液，室温100转旋蒸4小时，除去三氯甲烷，剩余液体10000转离心10分钟，得沉淀，用5ml注射用水10000转离心10分钟洗涤两次，加0.2%叠氮钠水溶液2ml，置超声反应器中，选择频率45kHz超声1～2分钟，得浓度为10mg/ml的量子点荧光微球混悬液，2℃～8℃ 贮藏；量子点荧光微球标记探针的制备：取0.1ml浓度为10mg/ml的量子点荧光微球混悬液，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，加入1ml浓度为10mMol、pH值为6.5的磷酸缓冲液使悬浮，加入150μg碳二亚胺，混合10～20分钟，加入100μgN‑羟基琥珀酰亚胺，混合10～20分钟，室温反应40分钟，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，加入1ml浓度为10mMol、pH值为6.5的磷酸缓冲液使悬浮，加入100μg的抗MxA单克隆标记抗体，混合10～20分钟，室温搅拌反应60分钟，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，加入1ml含0.5%牛血清白蛋白，20mMol乙醇胺的浓度为10mMol、pH值为7.5的磷酸缓冲液使悬浮，混合10～20分钟，室温旋蒸反应2小时，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，置超声反应器中，加入0.1ml浓度为10mMol、pH值为6.5的磷酸缓冲液，选择频率45kHz超声1分钟，使悬浮，2℃～8℃贮藏，得量子点荧光微球标记探针；NC膜的喷涂划线：将浓度为0.5mg/ml的羊抗鼠二抗以1μl/mm的喷量喷涂于NC膜的质控线，将浓度为1mg/ml的鼠抗人MxA单克隆包被抗体以1μl/mm的喷量喷涂于NC膜的检测线，质控线与检测线相距4mm，37℃ 干燥12小时，得喷涂后的NC膜；量子点荧光微球标记垫的制备：取量子点荧光微球标记探针，10000转离心10分钟，得沉淀，置超声反应器中，加入0.1ml含5%蔗糖，1%牛血清白蛋白，0.5%吐温‑20，1%聚乙二醇2000,浓度为10mMol、pH值为7.4的磷酸缓冲液，选择频率60kHz超声1分钟，使悬浮，以5μl/cm的喷量喷涂于标记垫上， 37℃ 干燥12小时，得量子点荧光微球标记垫；样品垫的处理：样品垫加入5ml含1%牛血清白蛋白，0.3%吐温‑20，浓度为10mMol， pH值为7.4的磷酸缓冲液室温浸泡2小时，37℃ 干燥12小时，得样品垫；试剂盒组装：将样品垫、标记垫、NC膜和吸水纸在PVC底板上顺次相互搭接粘贴，然后裁切成4mm宽的试纸条，压入塑料卡克，得MxA诊断试剂盒。