[发明专利]一种超灵敏、多残留检测晚期糖基化终末产物的方法和应用

摘要

本发明公开了一种超灵敏、多残留检测晚期糖基化终末产物的方法和应用。所述方法首先制备以金纳米线电极为基底电极，并通过巯基乙酸共价偶联戊糖素的电化学免疫传感器。基于戊糖素单克隆抗体能与多种晚期糖基化终末产物产生交叉免疫反应，再结合间接竞争法，可实现对包括戊糖素、N(ε)羧甲基赖氨酸、N(ε)羧乙基赖氨酸、丙酮醛咪唑啉酮和精氨嘧啶在内的五种晚期糖基化终末产物的多残留检测。本发明提供的检测方法具有极高的灵敏度(检测限在0.2～0.4pg/mL之间)和非常宽的线性范围(0.0004～100ng/mL)。完全适用于临床上人体AGEs检测的需要，具有重要的实际应用价值。

主权项

1.一种超灵敏、多残留检测晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)电化学免疫传感器的制备：首先将打磨并清洗过的金纳米线电极置于巯基乙酸溶液中，使巯基乙酸自组装于金纳米线电极表面；再将其置于N‑溴代琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐的混合溶液中，活化羧基；最后置于戊糖素溶液中，通过酰胺键的形成使戊糖素共价偶联于金纳米线电极表面，即得到所述的电化学免疫传感器；步骤2)标准溶液的配制：配制含有晚期糖基化终末产物的乙醇溶液作为标准溶液，将含有浓度为0的晚期糖基化终末产物的标准溶液作为空白标样；步骤3)工作曲线的建立：将步骤1)制备的电化学免疫传感器浸入含有戊糖素单克隆抗体和步骤2)制备的标准溶液的磷酸缓冲溶液中恒温孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗电化学免疫传感器，然后将其置于5mmol/L二茂铁的乙腈溶液中进行差分脉冲伏安扫描；以孵育前后响应电流变化值ΔI对标准溶液中晚期糖基化终末产物浓度的对数值logC作图，得ΔI‑logC工作曲线，采用线性回归法获得ΔI‑logC线性回归方程；步骤4)晚期糖基化终末产物的测定：配置含有待测样品的乙醇溶液，按照与步骤3)相同的方法对所述电化学免疫传感器进行孵育和差分脉冲伏安扫描，记录响应电流变化值ΔIx，将其代入ΔI‑logC线性回归方程，即可得出待测样品中晚期糖基化终末产物的浓度。