[发明专利]一种天然组织来源的髓核脱细胞材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种天然组织来源的髓核脱细胞材料的制备方法，将哺乳动物任意大小的髓核组织经含蛋白酶抑制剂的PBS、含NaCl的PBS缓冲液、含Triton X的PBS缓冲液、含SDS的PBS缓冲液、含DNA酶的PBS缓冲液处理，获得天然组织来源的髓核脱细胞材料。本发明能对组织上的细胞进行完全去细胞化处理，且条件温和、无ECM损害、快速稳定。所得的材料，不仅最大限度的模拟了天然的髓核结构、较好的保留了细胞外基质成分、还具有极低的免疫原性等优点，可用于修复临床上各类病因造成的椎间盘损伤、髓核退变相关疾病。

主权项

1.一种天然组织来源的髓核脱细胞材料的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：(1)取宰杀12h以内任意哺乳动物胸5到腰6脊椎，用刀分离出椎间盘，然后切开纤维环取出髓核；用含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液漂洗髓核3次，每次30min，去除血液，贴附的脂肪碎片和其他杂质；(2)在含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24‑48小时；然后用液氮冻融3个循环；(3)在含NaCl的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24‑48小时；(4)在含Triton X的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24‑48小时；(5)在含SDS的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24‑48小时；(6)在含DNA酶的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，37℃摇床120rpm震荡12‑24小时；步骤(2)‑(6)中，每个步骤完成后均用生理盐水冲洗8小时。