[发明专利]一种禽蛋中氨基甲酸酯类药物残留量测定的方法

摘要

本发明涉及一种禽蛋中氨基甲酸酯类药物残留量测定的方法。本发明禽蛋中氨基甲酸酯类药物残留量的测定方法包括：样品制备；样品前处理；有机溶剂提取；固相萃取柱去除色素杂质，氮气吹至近干，以流动相溶解残渣，溶液经滤膜过滤供UPLC‑TQS分析；标准溶液的配制；高效液相色谱‑串联质谱仪测定等过程。本发明的方法，操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率快，回收率和重复性好，可实现禽蛋中氨基甲酸酯类药物残留量的同时测定。

主权项

1.一种禽蛋中氨基甲酸酯类药物残留量测定的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）样品制备：将禽蛋去壳后、匀浆，冷冻保存，得禽蛋样品；（2）样品前处理：准确称取经步骤（1）制得的禽蛋样品2g，置于50mL聚丙烯离心管中，加入10 mL 0.1%甲酸乙腈粗提取液，均质1min后，振荡10 min，在4℃，以8000 r/min离心8min，提取上清液于鸡心瓶中，得提取液；沉淀物用10 mL 0.1%甲酸乙腈粗提取液重复提取1次，得提取液；合并两次提取液，加入2mL异丙醇，于旋转蒸发仪50℃浓缩至近干，得浓缩液；浓缩液中加入2.0mL甲醇与二氯甲烷的混合溶液溶解残渣，混匀，得待净化溶液，置于烧杯中；将固相萃取柱依次用5mL的甲醇、5mL甲醇与二氯甲烷的混合溶液预淋洗、条件化，当溶剂液面到达固相萃取柱吸附层表面时，立即将烧杯中的待净化溶液倒入固相萃取柱，用15mL刻度离心管接收洗脱液，再用5mL的甲醇与二氯甲烷的混合溶液冲洗烧杯后，将烧杯中的溶液用于洗脱固相萃取柱，并重复一次，合并三次洗脱液；将盛有10mL洗脱液的刻度离心管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮气吹干，用乙腈与超纯水的混合溶液定容至1.0mL，在旋涡混合器上混匀，经0.22μm有机滤膜过滤，供高效液相色谱‑串联质谱仪测定；所述0.1%甲酸乙腈粗提取液中甲酸与乙腈的体积比为1：999；所述甲醇与二氯甲烷的混合溶液中甲醇与二氯甲烷体积比为1：99；所述乙腈与超纯水的混合溶液中乙腈与超纯水体积比为1：1；（3）标准溶液的配制：混合标准工作液用乙腈稀释，配制成具有系列梯度浓度的混合标准工作液，以乙腈与超纯水的混合溶液定容；所述乙腈与超纯水的混合溶液中乙腈与超纯水体积比为1：1； （4）高效液相色谱‑串联质谱仪测定：将系列梯度浓度的工作液注入配有三重四级杆的高效液相色谱‑串联质谱仪中，进行超高效液相色谱‑串联质谱测定；其中，超高效液相色谱测定条件如下：UPLC ACQUITY BEHC18柱，50×2.1 mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%的甲酸水溶液；流速：0.3mL/min；柱温：35℃；进样量：3μL；流动相梯度及时间如下表：质谱条件如下：离子源：ESI，正离子模式；毛细管电压：0.5 kv；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度600℃；脱溶剂气流量：1000 L/ hr；锥孔反吹气流量150 L/ hr；锥孔电压：35v；扫描方式：MRM多反应监测；监测氨基甲酸酯类药物的中文名称、母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量条件如下：其中，带*为定量碎片离子；（5）残留量测定结果的计算：以保留时间对丁硫克百威、3‑羟基克百威、涕灭威砜、克百威、涕灭威、涕灭威亚砜、甲奈威和灭多威这八种氨基甲酸酯类药物进行定性分析，以峰面积进行上述八种氨基甲酸酯类药物的定量分析，用外标法计算结果。