[发明专利]人双调蛋白克隆至人工改造的表达载体pGEX-4T-1及其原核可溶性表达的研究在审
| 申请号： | 201810144233.7 | 申请日： | 2018-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN108220320A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 黄娟;李学斌;万惠丹 | 申请（专利权）人： | 武汉伊艾博科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/12;C12N1/21;C07K19/00;C07K14/47;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430079 湖北省武汉市东湖开发区关*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了将人双调蛋白克隆至人工改造的表达载体pGEX‑4T‑1及其原核可溶性表达的研究成果，解决了真核外源基因在原核表达系统内易形成包涵体的问题。通过切除原核表达载体pGEX‑4T‑1上GST（谷胱甘肽转移酶）标签，添加促溶标签SUMO，构建重组质粒pGEX‑SUMO；然后将人双调蛋白基因AREG克隆至重组质粒pGEX‑SUMO上；再对目标蛋白可溶性表达条件进行优化，分离纯化出重组天然蛋白SUMO‑AREG；最后对SUMO‑AREG酶切去除标签，进一步纯化获得重组蛋白AREG。本发明能生产出具有天然结构的重组蛋白AREG，对后期人双调蛋白的生理功能的研究提供一个好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 双调蛋白 可溶性表达 表达载体 人工改造 重组蛋白 标签 克隆 原核 谷胱甘肽转移酶 构建重组质粒 原核表达系统 原核表达载体 分离纯化 目标蛋白 生理功能 天然蛋白 天然结构 外源基因 重组质粒 包涵体 酶切 真核 去除 研究 切除 基因 优化 生产 | ||
【主权项】：
1.人双调蛋白克隆至人工改造的表达载体pGEX‑4T‑1，其特征在于，包括下述步骤，（1）通过双酶切、连接、转化等方法成功构建融合表达载体pGEX‑4T‑1‑SUMO；（2）人工合成人双调蛋白基因AREG，AREG和pGEX‑4T‑1‑SUMO经BamHl和Xhol 双酶切后连接，构建重组质粒pGEX‑4T‑1‑SUMO‑AREG；（3）然后用CaCl2法将重组质粒转化到原核表达宿主Rosetta(DE3)中，构建工程菌。
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