[发明专利]促进多能干细胞分化为心肌细胞成熟的方法有效
| 申请号： | 201810122820.6 | 申请日： | 2018-02-07 |
| 公开（公告）号： | CN108060125B | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 赵振奥;胡士军;苗淑梅;雷伟;沈振亚;陈一欢 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 冯瑞;杨慧林 |
| 地址： | 215104 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及促进多能干细胞分化为心肌细胞成熟的方法：在第0～1天对传代培养至4～5代的多能干细胞进行诱导分化，使用的培养基中含有2～15μM的GSK‑3抑制剂；在第2～3天使用培养基继续诱导分化；在第4～5天使用含有2～10μM的Wnt抑制剂的培养基诱导分化；在第14～20天使用含有0.2～5μM视黄酸的培养基继续诱导分化，以后利用培养基对细胞进行诱导分化培养；其中，在第1～6天，使用第一诱导分化培养基，其包括RPMI‑1640基础培养基、B27‑insulin；在第7天以后，使用第二诱导分化培养基，其包括RPMI‑1640基础培养基以及B27；或者在整个诱导分化培养过程中，使用CDM3诱导分化培养基或无血清的诱导分化培养基，其中CDM3诱导分化培养基包括RPMI‑1640基础培养基、血清白蛋白、抗坏血酸和双抗。 | ||
| 搜索关键词： | 促进 多能 干细胞 化为 心肌 细胞 成熟 方法 | ||
【主权项】：
1.一种促进多能干细胞分化为心肌细胞成熟的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在第0～1天对传代培养至4～5代的多能干细胞进行诱导分化，所使用的培养基中含有2～15μM的GSK-3抑制剂；(2)在第2～3天使用培养基继续诱导分化；(3)在第4～5天使用含有2～10μM的Wnt抑制剂的培养基继续进行诱导分化；(4)第7天以后利用培养基对细胞进行诱导分化，第9～10天观察到心肌细胞的跳动；(5)在第14～20天使用含有0.2～5μM视黄酸的培养基继续诱导分化，以后利用培养基对细胞进行诱导分化培养；其中，在第1～6天，使用的培养基为第一诱导分化培养基，所述第一诱导分化培养基包括RPMI-1640基础培养基、不含胰岛素的细胞培养添加剂B27；在第7天以后，使用的培养基为第二诱导分化培养基，所述第二诱导分化培养基包括RPMI-1640基础培养基以及含胰岛素的细胞培养添加剂B27；或者在整个诱导分化过程中，使用的培养基为CDM3诱导分化培养基或无血清的诱导分化培养基，所述CDM3诱导分化培养基包括RPMI-1640基础培养基、血清白蛋白、抗坏血酸和双抗。
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