[发明专利]一种基于RP-SAX-RP平台的蛋白质组序列分析方法在审
| 申请号： | 201810104946.0 | 申请日： | 2018-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN108303489A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 戚良 | 申请（专利权）人： | 上海悦良生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/89 | 分类号： | G01N30/89;G01N27/62 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200086 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于RP‑SAX‑RP平台的蛋白质组序列分析方法，其展示了基于高PH反相‑强阴离子交换‑低PH反相的自动化纳升级流速3DLC‑MS/MS平台的分离手段来分析复杂蛋白质组；在分析来自大肠杆菌的胰蛋白酶肽时，RP‑SAX‑RP优于RP‑RP技术，而且实现了对每个酿酒酵母细胞出现50个拷贝水平蛋白质的鉴定，相应于在低分辨率的3‑D离子阱质谱仪上来自40μg总裂解物的500amol的检测极限；在LTQ‑Orbitrap上进行了相似的研究，在单个101fractionRP‑SAX‑RPLC‑MS/MS吸收分析下，从5μg总酵母裂解物中产生超过4000个特异性蛋白质，为每个细胞50拷贝数的蛋白质表达提供了约65amol的检测上限。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白质组 序列分析 反相 胰蛋白酶 酿酒酵母细胞 特异性蛋白质 大肠杆菌 蛋白质表达 复杂蛋白质 酵母裂解物 阴离子交换 低分辨率 分离手段 拷贝水平 分析 拷贝数 裂解物 质谱仪 检测 低PH 高PH 蛋白质 自动化 细胞 升级 吸收 展示 研究 | ||
【主权项】：
1.一种基于RP‑SAX‑RP平台的蛋白质组序列分析方法，其特征在于，包括3D RP‑SAX‑RP系统的构建；包括以下步骤：(1)3D RP‑SAX‑RP平台包括Waters UPLC、等度泵、自动进样器和附加的二位六端口切换阀；(2)一维反相柱子包括一个用5μm直径的XBridge C18树脂填满的250μm内径、15cm长的毛细管，SAX柱子被直接并联接在一维RP柱子的排放口；(3)等度泵以2μL/min的速度穿过进样回路来传递多肽样品或一维和二维洗脱液；(4)二元泵以8μL/min传递0.1％甲酸来洗脱有机含量并在三维前置柱之前酸化一维、二维流出物，或提供经约10nL/min流速的LC‑MS/MS分析中三维反相柱多肽的梯度洗脱；(5)一个Digital PicoView电喷射资源平台被用于在LC‑MS/MS吸收过程中自动地安置发射尖端到加热的金属毛细管入口处，或用于在注射多肽样品或一维/二维洗脱液时安置在重力驱使的液滴状态下面。
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