[发明专利]一种仿刺参体壁中抗菌肽的分离纯化方法

摘要

本发明涉及多肽的分离纯化，公开了一种仿刺参体壁中抗菌肽的分离纯化方法，该方法包含以下步骤：1）材料预处理；2）乙酸浸提；3）超滤；4）大孔吸附树脂层析；5）高速逆流色谱纯化；6）葡聚糖凝胶层析。本发明通过刺激鲜活仿刺参产生大量抗菌肽，并根据仿刺参体壁中的抗菌肽最有效成分T1的性质，选择最适的分离纯化方法，得到了高纯度的抗菌肽，对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌及枯草芽孢杆菌的抗菌效果最好，能够替代仿刺参养殖过程中投放的药物，从而减少仿刺参体内的药物残留，对保障仿刺参产品的质量安全、食品产业的健康发展具有促进作用。

主权项

1.一种仿刺参体壁中抗菌肽的分离纯化方法，其特征在于：该方法包含以下步骤：1）材料预处理：将鲜活仿刺参用含枯草芽孢杆菌的海水暂养8‑12天，用过滤海水冲洗后，去肠道，称重，破碎；2）乙酸浸提：将破碎后的仿刺参体壁组织按体积比1:0.8‑1.2加入乙酸，混匀，浸提20‑28h，然后将混合物离心，取上清液留存，沉淀物再次加入相同比例的乙酸，再次浸提、离心，取上清液，合并两次上清液，得粗提液；3）超滤：粗提液分别过0.45μm和0.22μm滤膜除杂除菌后，超滤，截留分子量1kD以下的滤过液；4）大孔吸附树脂层析：将滤过液上样，用去离子水洗涤至无吸收峰，再用浓度分别为25%，50%，75%和95%的乙醇溶液作为洗脱剂洗脱，收集由75%的乙醇洗脱得到的洗脱液，干燥得多肽粉末；5）高速逆流色谱纯化：将溶剂正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水混合后分液，得有机相和水相，水相作为流动相，有机相为固定相，将多肽粉末溶于流动相，高速逆流色谱进样后收集排出液；6）葡聚糖凝胶层析：将排出液层析后真空冷冻干燥，得所需抗菌肽。