[发明专利]一种利用数字PCR技术检测EGFRG719X基因变异的方法

摘要

本发明公开了一种利用数字PCR技术检测EGFR G719X基因变异的方法。以数字PCR为检测平台，针对EGFR G719X基因的三种变异形式设计用于检测EGFR G719X基因变异的上下游引物、探针，并将待测样品cfDNA模板、用于检测EGFR G719X基因变异的上下游引物、探针以及PCR预混液混合，制备ddPCR微反应液滴进行PCR扩增反应，判断待测样品中是否含有EGFR G719X基因变异的模板和发生突变的模板含量。本发明的引物和探针特异性强，应用于PCR检测时灵敏度可达0.01％；且利用此套引物进行PCR扩增，扩增出来的片段仅94bp，特别适用于血浆游离DNA等小片段DNA样本的扩增，能从cfDNA中检测到极低丰度的变异，对于指导临床治疗、改善患者预后有重要作用；本方法能一次检测EGFR G719X基因的三种变异形式，大大降低临床检测成本及工作量。

主权项

ddPCR技术检测EGFR G719X基因变异的引物和探针，其特征在于，EGFR G719X基因变异包括EGFR G719A基因变异、EGFR G719S基因变异和EGFR G719C基因变异，用于检测EGFR G719X基因变异的上游引物序列如SEQ ID NO：1所示，用于检测EGFR G719X基因变异的下游引物序列如SEQ ID NO：2所示，EGFR G719A基因变异的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，EGFR G719S基因变异的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，EGFR G719C基因变异的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，EGFR G719X野生型的检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。