[发明专利]鉴定调控FATP1基因启动子转录活性的调控元件的方法在审

专利信息
申请号: 201810031802.7 申请日: 2018-01-12
公开(公告)号: CN108384790A 公开(公告)日: 2018-08-10
发明(设计)人: 赵志东;昝林森;胡江;刘秀 申请(专利权)人: 甘肃农业大学
主分类号: C12N15/52 分类号: C12N15/52;C12N15/85;C12Q1/26
代理公司: 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 代理人: 吕玉博
地址: 730070 *** 国省代码: 甘肃;62
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摘要: 发明提供鉴定调控FATP1基因启动子转录活性的调控元件的方法,包括以下步骤:克隆FATP1基因启动子序列;构建系列缺失FATP1基因5′端启动子片段荧光素酶报告载体;将上述荧光素酶报告载体分别转染细胞,进行荧光素酶活性分析,确定FATP1基因核心启动子活性区域;分析该活性区域内转录因子结合位点,对转录因子结合位点进行定点突变,根据突变后FATP1基因启动子活性变化情况,确定调控FATP1基因启动子转录活性调控元件。本发明对调控FATP1基因启动子转录活性调控元件进行鉴定,最终确定了KLF15转录因子结合位点是调控FATP1基因启动子转录活性的调控元件。
搜索关键词: 基因启动子 调控元件 转录活性 转录因子结合位点 调控 荧光素酶报告 活性区域 基因启动子活性 基因启动子序列 荧光素酶活性 核心启动子 启动子片段 定点突变 转染细胞 基因 构建 突变 分析 克隆
【主权项】:
1.鉴定调控FATP1基因启动子转录活性的调控元件的方法,包括以下步骤:(1)克隆FATP1基因启动子序列;(2)构建FATP1基因5′端启动子系列缺失片段荧光素酶报告载体;(3)将步骤(2)的FATP1基因5′端启动子系列缺失片段荧光素酶报告载体分别进行转染细胞,进行荧光素酶活性分析,确定FATP1基因核心启动子活性区域;(4)分析FATP1基因核心启动子活性区域内的转录因子结合位点,对转录因子结合位点分别进行定点突变,根据突变后的FATP1基因启动子活性变化情况确定调控FATP1基因启动子转录活性的调控元件:若对转录因子结合位点突变后,启动活性显著下降则说明该转录因子结合位点是调控FATP1基因启动子转录活性的调控元件。
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