[发明专利]一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品

摘要

本发明公开一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品，该方法包括以下步骤：用EB66传代细胞分别接种鸡新城疫、禽流感病毒株，在病毒EID50效价达到最高时收获病毒并保存；分别灭活鸡新城疫和禽流感病毒；将灭活后的鸡新城疫和禽流感病毒在吐温‑80中完全混合，得到病毒混合液；在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化配制成二联疫苗。本发明通过采用鸭胚胎干细胞EB66传代细胞系分别进行鸡新城疫和禽流感病毒的培养，然后制备成的二联疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。 1

主权项

1.一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用EB66传代细胞分别接种鸡新城疫、禽流感病毒株；

(2)在病毒EID₅₀效价达到最高时分别收获鸡新城疫、禽流感病毒并保存；

(3)分别灭活鸡新城疫、禽流感病毒；

(4)将灭活后的鸡新城疫和禽流感病毒在吐温‑80中完全混合，得到病毒混合液，在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化，配制成鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗。

2.如权利要求1所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，步骤(3)的具体操作如下：在病毒中加入甲醛溶液，充分搅拌并混合，甲醛溶液的最终浓度为0.1％，37℃条件下灭活30小时。

3.如权利要求1所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，步骤(4)的具体操作如下：

(a)油相佐剂制备：取注射用白油和司本‑80混合，搅拌混匀，灭菌，冷却后备用；

(b)病毒混合液制备：将灭活后的新城疫病毒和禽流感病毒按1:1的比例混合，在混合病毒液中加入灭菌冷却后的吐温‑80，充分搅拌至完全溶解，得到病毒混合液；

(c)乳化：在油相佐剂中缓慢加入所述病毒混合液，充分搅拌后乳化。

4.如权利要求3所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法其特征在于，所述油相佐剂与所述病毒混合液的混合体积比为3:2。

5.如权利要求3所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法其特征在于，混合病毒液与吐温‑80的体积为96:4。

6.如权利要求3所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法其特征在于，所述白油和司本‑80的混合体积比为94:6。

7.如权利要求1所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体步骤为：用EB66传代细胞分别接种鸡新城疫、禽流感病毒株后，分别进行吸附，然后分别补加新的病毒生产培养基，其中，禽流感病毒补加原工作体积1倍的生产培养基，新城疫病毒补加原工作体积1.5倍的生产培养基。

8.如权利要求1所述生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于在，在步骤(1)EB66细胞培养病毒时还需补加TPCK胰酶，其中，禽流感病毒在接毒后的第0天和第1天各补加2mg/L的TPCK胰酶或在接毒后第0天一次性补加4mg/L的TPCK胰酶；新城疫病毒在接毒后的第0、1、2、3天各补加1mg/L的TPCK胰酶或在病毒接种后第0天一次性补加4mg/L的TPCK胰酶。

9.一种通过权利要求1～8任一项所述的方法制备的细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗。

10.如权利要求9所述细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗，其特征在于，所述的新城疫病毒为新城疫病毒lasota株，所述的禽流感病毒为禽流感病毒H9亚型DA株。