[发明专利]一种新型秀丽隐杆线虫同步化的方法

摘要

本发明一种新型秀丽隐杆线虫同步化的方法。将900‑1100目尼龙筛网制作成圆环型过滤网；配制固体培养基；将培养的处于不用时期的秀丽隐杆线虫用缓冲液冲洗到离心管中，离心弃去上清液，将其转移过滤网中；将食盐水滴加至过滤网中使线虫趋避扩散，L1期的秀丽隐杆线虫穿透尼龙筛网，活动于圆环型过滤网外侧的培养基上；然后用缓冲液冲洗圆环型过滤网外侧的培养基上的L1期的秀丽隐杆线虫至离心管中，离心弃去上清液，得L1期秀丽隐杆线虫；将L1期秀丽隐杆线虫接至含大肠杆菌的培养基中培养得L4期线虫。本发明物理分离筛选方法，操作简单，无需裂解，对线虫不会造成伤害，可解决由于线虫裂解不充分导致不能完全同步化的问题。

主权项

1.一种新型秀丽隐杆线虫同步化的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选取900‑1100目尼龙筛网，将其制作成直径1cm、高度1cm的圆环型过滤网；2)配制固体培养基，110‑130℃高压灭菌15‑25min后制备平板，平板厚度0.4‑0.6cm，在培养基凝固之前，将圆环型过滤网置于平板中央，过滤网高度超过培养基表面0.4‑0.6cm，然后冷却凝固；3)将已培养3‑4天的处于不用时期的秀丽隐杆线虫用0.15‑0.25mL缓冲液冲洗到离心管中，然后将离心管放置到离心机中离心，弃去上清液，静置4‑6min后，将其转移至培养基的圆环形过滤网中；4)NaCl溶液作为秀丽隐杆线虫的驱避剂，将其滴加至圆环型过滤网中使线虫趋避扩散，在盐水的驱避作用下，秀丽隐杆线虫逃散，L1期的秀丽隐杆线虫穿透900‑1100目尼龙筛网，活动于圆环型过滤网外侧的培养基上；5)8‑12min后，用0.15‑0.25mL缓冲液冲洗圆环型过滤网外侧的培养基上的L1期的秀丽隐杆线虫至离心管中，然后将离心管放置到离心机中离心，弃去上清液，重复冲洗3次，得L1期秀丽隐杆线虫；6)将L1期秀丽隐杆线虫接至含大肠杆菌的培养基中，18‑22℃培养45‑50h，得L4期线虫。