[发明专利]一种小黄鱼微卫星富集文库的构建方法在审
| 申请号： | 201711339116.8 | 申请日： | 2017-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN108118051A | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | 刘炳舰;吕振明;龚理;刘立芹;柳意樊 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 吴秉中 |
| 地址： | 316000 浙江省舟*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种小黄鱼微卫星富集文库的构建方法，包括酶切，接头溶液制备，接头连接，连接产物PCR扩增，磁珠富集，文库构建。有益效果为：本发明公开的构建方法简单高效，过程中DNA片段的损失少，成本低，为小黄鱼遗传多样性检测、种群遗传结构分析和亲权鉴定等研究提供了理想的DNA片段。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 微卫星富集文库 遗传多样性 磁珠富集 接头连接 结构分析 连接产物 溶液制备 文库构建 种群遗传 酶切 检测 研究 | ||
【主权项】：
一种小黄鱼微卫星富集文库的构建方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)酶切：从小黄鱼肌肉或鳍条组织中提取基因组DNA，使用限制性内切酶RsaI对小黄鱼基因组DNA进行酶切；2)接头溶液制备：将接头SuperSNX24 Forward：5’GTTTAAGGCCTAGCTAGCAGAATC和接头SuperSNX24+4P Reverse：5’pGATTCTGCTAGCTAGGCCTTAAACAAAA分别制成10μM的水溶液，等体积混合，得接头溶液；3)接头连接：将酶切片段与接头溶液混合，得连接产物；4)连接产物PCR扩增：以连接产物为模板，进行PCR反应；5)磁珠富集：将连接产物的PCR扩增产物与生物素探针杂交，接着将杂交产物与包被有链霉素的磁珠混合，接着洗脱磁珠表面的富集片段，以洗脱片段为模板进行PCR扩增反应；6)文库构建：将洗脱片段的PCR扩增产物与克隆载体相连接，然后转入大肠杆菌感受态细胞，构建小黄鱼微卫星富集片段的克隆文库。
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