[发明专利]一种用硫代硫酸钠防止烟草外植体褐化的方法

摘要

本发明是一种用硫代硫酸钠防止烟草外植体褐化的方法。包括如下步骤：植物种子的消毒，植物种子培养，植物外植体培养，植物外植体防褐化培养，植物外植体的继代防褐化培养，得到的植物外植体褐化率为18.7‑23.3％。可以有效缓解外植体褐化现象，可以改善外植体整体的分化状态。添加硫代硫酸钠(Na₂S₂O₃)在培养基中，以及添加天然的抗氧化成分，具有使用方便、成本低、效果好等优点。

主权项

一种用硫代硫酸钠防止烟草外植体褐化的方法，其特征在于；包括如下步骤：步骤（1），植物种子的消毒；步骤（2），植物种子培养：将步骤(1)得到的消毒后的植物种子接种到MS培养基中，在培养温度为25±1℃，光照强度30‑50μmol/(m²·s)，光照时间为16h/d的条件下培养60d，种子发芽长成为幼苗，所述的MS培养基为：MS基本培养基+30g/L蔗糖+4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.7 ；步骤（3），植物外植体培养：将步骤(2)中得到的种子幼苗叶盘置于MS分化培养基中，在培养温度28℃时，光照培养16h/d，25℃黑暗培养8h/d，光照强度30‑50μmol/(m²·s)，培养5天，得到烟草愈伤组织，所述MS分化培养基为：MS 基本培养基+0.5mg/L萘乙酸NAA+2mg/L6‑苄基腺嘌呤6‑BA+30g/L蔗糖+4g/L琼脂，培养基的pH 值为5.7 ；步骤（4），植物外植体防褐化培养：将步骤(3) 中得到的植物外植体置于MS初步防褐化培养基中，在培养温度28℃时，光照培养16h/d，25℃黑暗培养8h/d，光照强度30‑50 μmol/(m²·s)的条件下培养20d，得到烟草愈伤组织，MS初步防褐化培养基为：MS基本培养基中加入防褐添加剂1.0‑5.0g/L硫代硫酸钠(Na₂S₂O₃)、30g/L蔗糖、4g/L琼脂，培养基的pH 值为5.7；步骤（5），植物外植体的继代防褐化培养：1）洋甘菊提取液的制备：选取刚过观赏期的洋甘菊摘下花朵洗净，榨取汁液，将汁液过滤除去固体残渣，在超净工作台中使用0.22μm滤头过滤灭菌，制成无菌提取液；2）金盏花提取液的制备：选取刚过观赏期的金盏花摘下花朵洗净，榨取汁液，将汁液过滤除去固体残渣，在超净工作台中使用0.22μm滤头过滤灭菌，制成无菌提取液；3）西红柿提取液的制备：西红柿带皮榨取汁液，将汁液过滤除去残渣，在超净工作台中使用0.22μm滤头过滤灭菌，制成无菌提取液；4）将步骤(4)中得到的初步防褐化植物外植体置于MS继代防褐化培养基中，在培养温度在培养温度28℃时，光照培养16h/d，25℃黑暗培养8h/d，光照强度30‑50μmol/(m²·s)的条件下培养20d，得到褐化率为18.7‑23.3％的植物外植体；所述的MS继代防褐化培养基为：MS基本培养基中加入防褐添加剂100‑200mg/L洋甘菊提取液、100‑200mg/L金盏花提取液、100‑200mg/L西红柿提取液、30g/L蔗糖、4g/L琼脂，培养基的pH 值为5.7。