[发明专利]检测待测mRNA是否含有miRNA靶位点的方法及其应用

摘要

本发明公开了检测待测mRNA是否含有miRNA靶位点的方法及其应用。该方法包括：1)提供目的miRNA表达载体和待测mRNA表达载体；待测mRNA表达载体能在生物细胞中转录出名称为起始密码子区‑待测mRNA‑kozak‑报告基因mRNA的mRNA分子，该mRNA分子由起始密码子区、位于起始密码子区下游的待测mRNA‑kozak的区段和位于待测mRNA‑kozak下游的报告基因mRNA连接而成；2)构建导入目的miRNA表达载体和待测mRNA表达载体的重组生物细胞；3)检测重组生物细胞中的所述报告基因的表达情况，确定待测mRNA是否含有目的miRNA的靶位点。本发明可用于筛选miRNA靶基因。

主权项

1.检测待测mRNA是否含有miRNA靶位点的方法，包括：1)提供目的miRNA表达载体和待测mRNA表达载体；所述目的miRNA表达载体为能在生物细胞中生成目的miRNA的载体；所述待测mRNA表达载体能在所述生物细胞中转录出名称为起始密码子区‑待测mRNA‑kozak‑报告基因mRNA的一条mRNA分子，所述起始密码子区‑待测mRNA‑kozak‑报告基因mRNA由起始密码子区、位于所述起始密码子区下游的名称为待测mRNA‑kozak的区段和位于所述待测mRNA‑kozak下游的报告基因mRNA连接而成；所述起始密码子区含有X个AUG；所述X为1或1以上的自然数；所述起始密码子区‑待测mRNA‑kozak‑报告基因mRNA满足以所述起始密码子区中的AUG作为起始密码子时，所述报告基因mRNA不能正常读码导致所述报告基因不能表达的条件；所述待测mRNA‑kozak由待测mRNA和位于所述待测mRNA下游的kozak序列连接而成；所述kozak序列的3′末端的四个核苷酸是5′‑AUGG‑3′；所述报告基因mRNA和所述待测mRNA‑kozak的连接关系满足所述kozak序列的3′末端的四个核苷酸中的AUG作为起始密码子时，所述报告基因mRNA能正常读码，所述报告基因能表达的条件；2)构建导入所述目的miRNA表达载体和所述待测mRNA表达载体的重组生物细胞；3)检测所述重组生物细胞中的所述报告基因的表达情况，根据所述重组生物细胞中的所述报告基因的表达情况，确定所述待测mRNA是否含有所述目的miRNA的靶位点：如果所述重组生物细胞中检测到所述报告基因的表达，所述待测mRNA含有所述目的miRNA的靶位点；如果所述重组生物细胞中没有检测到所述报告基因的表达，所述待测mRNA不含有所述目的miRNA的靶位点。