[发明专利]鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法

摘要

本发明公开了一种鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法，包括材料取样、组织固定、脱水及透明、浸蜡、包埋、切片、贴片和烤片、脱蜡、复水、染细胞核、染细胞质、脱水、透明和封固等步骤。本发明较现有石蜡切片制作方法极大地提高了鱼卵巢组织石蜡制备固定的效果，提高了鱼卵巢组织石蜡组织切片的染色效果，改善了脱水和透明的效果，极大地提高了镜下鱼类卵巢组织结构的完整性和清晰度，解决了现有技术在鱼类卵巢组织石蜡切片制作过程中存在的若干问题。为利用形态病理学、免疫学、细胞原位核酸分子杂交、形态计量领域方面应用的研究，为进一步从基因和蛋白水平进行鱼卵巢相关研究提供了支撑条件。

主权项

鱼类卵巢组织石蜡切片的制作方法，步骤如下：（1） 材料取样 鱼卵巢组织取样材料的体积为：3.6‑4 mm×3‑3.3mm×3‑3.3mm；（2）组织固定 鱼卵巢组织经Zamboni’s固定液固定8小时后，流水冲洗6小时，洗去其固定液；（3）脱水及透明 将（2）处理的组织依次用下列试剂处理：50%乙醇10min、70%乙醇15min、80%乙醇15min、95%乙醇90min、95%乙醇90min、无水乙醇2份+正丁醇1份60 min，无水乙醇1份+正丁醇1 份60 min、正丁醇45min、正丁醇45min；（4）浸蜡 将经（3）处理过的组织样放入熔化好石蜡的浸蜡盒中进行浸蜡，依次用下列试剂处理：正丁醇1份+:石蜡1份30min、石蜡90min、石蜡90min（5）石蜡包埋 将经（4）处理过的组织样放入熔化好石蜡的包埋盒中进行包埋，等石蜡自然冷却凝固后，把包埋好的蜡块从盒中取出修整；（6）切片 将（5）修整好的蜡块粘牢到准备好的小木块上，然后固定于切片机上，与切片刀调成平行，切成蜡带；（7）贴片和烤片 在（6）准备的切片中，选择有完整组织样的蜡带，蜡带光滑面向下，放入40~42℃水浴箱中展片后，用多聚赖氨酸处理过的载玻片从水中捞出，使组织样整齐排列在载玻片上，在切片作好标记，放置在切片架上，烘箱45℃烤片5.5‑6h，自然冷却；（8）脱蜡 将放有载玻片的切片架放入染色缸中，依次用下列试剂处理：二甲苯10min、二甲苯10min；（9）复水 将经（8）处理的切片依次用下列试剂处理：无水乙醇2min、无水乙醇2min、95%乙醇3min、80%乙醇3min、70%乙醇3min、自来水缓慢冲洗、蒸馏水2min；（10）染细胞核 将配置好的Harris氏苏木素液倒入染色缸，室温下把经（9）处理的切片放入染色缸10~20min，然后依次用下列试剂处理：自来水缓慢冲去浮色1min、1%盐酸酒精分化10s、1%氨水10 s、蒸馏水1~2min；（11）染细胞质 将经（10）染完细胞核的切片依次用下列试剂处理：伊红染液5min、自来水缓慢冲洗浮色30s；（12）脱水 将经（11）的切片依次用下列试剂处理：70%乙醇30s、80%乙醇30s、95%乙醇2min、无水乙醇2min、无水乙醇2min；（13）透明 将经（12）的切片依次用下列试剂处理：二甲苯5min、二甲苯5min；（14）封固 将经（13）透明好的切片晾干后，滴中性树胶，从一侧慢慢放下盖玻片，晾干后，用刀片刮去多余的树胶即可。