[发明专利]鲤春病毒血症病毒RT-PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及水产养殖技术领域，具体公开了鲤春病毒血症病毒的逆转录‑聚合酶链式反应检测试剂盒，本发明所述的鲤春病毒血症病毒逆转录‑聚合酶链式反应快速检测试剂盒，包括：5×逆转录缓冲液；逆转录酶；随机引物；2×反应混合缓冲液；优选设计的上、下游引物；Taq DNA聚合酶；阳性对照液；阴性对照液；ddH2O；本发明克服了现有鲤春病毒血症病毒检测方法的不足，提供一种新型逆转录‑聚合酶链式反应快速检测试剂盒及检测方法，本发明对鲤春病毒血症病毒临床诊断不仅切实可行，且具有快速、准确、特异的优点，满足了临床诊断的要求，为检测鲤春病毒血症病毒提供了便利条件。

主权项

1.鲤春病毒血症病毒RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(1)5×逆转录缓冲液(2)逆转录酶(3)随机引物(4)2×聚合酶链式反应混合缓冲液，包含以下成分：KClMgCl2Tris-HCl，pH5.8dNTP(5)优选的特异性检测引物：根据鲤春病毒血症病毒的核酸序列，设计用于检测鲤春病毒血症病毒的特异性检测引物，通过对所设计的引物对进行试验筛选，筛选出对鲤春病毒血症病毒具有非常高灵敏性和特异性的一对引物，上游引物P1：5’-GTGATTACAGATGGTACGGAC-3’，下游引物P2：5’-GCCAAATAACTCAAATCCACT-3’；(6)Taq DNA聚合酶(7)灭菌的ddH2O(8)阳性对照液：提取鲤春病毒血症病毒总RNA，逆转录获得cDNA，然后以cDNA为模板，以Pl、P2为引物，进行PCR扩增，将纯化回收的扩增产物连接到pMD18-T载体，以阳性克隆的重组质粒作为阳性对照；(9)阴性对照液：以ddH2O作为阴性对照。