[发明专利]一种柴达木大肥菇抗缺氧多糖的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种柴达木大肥菇抗缺氧多糖的鉴定方法，包括三种源多糖的分子量测定、多糖含量测定、结构鉴定和抗缺氧功能特性判定，以获取柴达木大肥菇抗缺氧多糖分子量、多糖含量、多糖结构特征和抗缺氧功能特性等多项参数，从而为柴达木大肥菇抗缺氧多糖的实际应用提供数据支撑，发挥其功效，对人类的健康发展提供帮助。

主权项

1.一种柴达木大肥菇抗缺氧多糖的鉴定方法，其特征在于：按以下步骤进行：一、柴达木大肥菇多糖分子量范围测定多糖分子量的测定流程：根据标准葡聚糖绘制分子量标准曲线→样品分子量的测定→分子量的确定；先测定出葡聚糖标准品在DEAE-52凝胶柱中的保留时间，以已知分子量标准品的保留时间tR为横坐标,以相应分子量的对数值为纵坐标lgMN，绘制出标准品分子量的标准曲线；1)将葡聚糖系列标准品3000、4320、50000、12600和110000Da分别用0.2N NaCl水溶液配成质量浓度为2mg/mL的溶液，按混合组分分离，加样1mL，按1管/min收集，测定保留时间；2)以IgMN分子质量对数对tR保留时间绘制标准曲线，得到线性回归方程，然后将浓度为2mg/mL的柴达木大肥菇子实体多糖与菌丝体多糖混合液加样，测定其保留时间，按保留时间计算出柴达木大肥菇子实体与菌丝体多糖的分子量；二、多糖含量测定1)制定标准曲线：精确配制0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液，然后分别配成0,0.005,0.01,0.015,0.02,0.025,0.03,0.035,0.04,0.045,0.05mg/mL不同浓度梯度的葡萄糖溶液，加入0.5mL6％苯酚溶液，5mL浓硫酸在沸水浴中加热15min后，取出立即放入流动水中冷却，用紫外分光光度计测定各样液的吸光度值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制出标准曲线；2)测定待测样品多糖含量：提取的大肥菇粗多糖，取多糖于150mL容量瓶中定容，取1mL溶液，加入1mL蒸馏水、1mL 6％苯酚溶液、5mL浓硫酸，至沸水浴中加热15min后，取出放入流动水中迅速冷却，用紫外分光光度计测定各样液在490nm处测定吸光值，通过标准曲线方程计算多糖含量，计算公式M＝(A-b)/K；其中M为多糖质量，单位为mg；A为反应后的样液在490nm处的吸光度值；b为标准曲线的纵截距；K为标准曲线的斜率；三、多糖结构测定1)取多糖冻干粉样品在离心管中用重水溶解第1次，然后冻干，用重水溶解第2次，再冻干，用重水溶解第3次，以去除样品中的普通水，全部替换为重水；2)得到的最终溶解体积为0.6mL、浓度为60-120mg/mL的液体移入核磁管，加入一滴丙酮作为内标，然后H谱检测2h，C谱检测12h。