[发明专利]一种促凝血苹果花有效成分及其提取分离方法、应用

摘要

本发明公开了一种促凝血苹果花有效成分的提取分离方法，包括以下步骤：将苹果花粉碎后用石油醚脱脂，然后用乙醇浸泡提取，得到乙醇总浸膏，将乙醇总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到乙酸乙酯部位；将乙酸乙酯部位经大孔树脂吸附上样，用水和乙醇梯度洗脱，得到60%乙醇提取物和90%乙醇提取物；将60%乙醇提取物和90%乙醇提取物分别进一步分离纯化，得到化合物1~4，分别为根皮苷、山奈酚、根皮素和β‑谷甾醇。本发明采用特殊的方法从苹果花中乙酸乙酯部位分离得到了4个化合物，并对4个化合物的体外促凝血效果的考察，结果表明，4个化合物均具有良好的促凝血效果，它们可以单独或组合用于制备促凝血剂。

主权项

一种促凝血苹果花有效成分的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以干燥的苹果花为原料，粉碎后用石油醚脱脂，得到脱脂后的苹果花；将脱脂后的苹果花采用乙醇浸泡提取，减压回收溶剂，得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压回收溶剂后，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；2）将步骤1）所得乙酸乙酯部位用体积浓度为65~75%的乙醇溶解后，D101大孔树脂吸附上样，静置12~14 h，依次用水、30%乙醇、60%乙醇和90%乙醇进行梯度洗脱，每个比例溶剂至少洗脱3个柱体积，减压回收溶剂后，得到水提物、30%乙醇提取物、60%乙醇提取物和90%乙醇提取物；3）将60%乙醇提取物的第一柱体积和第二柱体积合并在一起，采用两次硅胶H常压柱色谱分离，第一次用二氯甲烷‑丙酮进行梯度洗脱，第二次用二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，得到3个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分1、组分2、组分3；组分3先经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱纯化，后经中压液相制备色谱，收集最高峰，浓缩、干燥，得到化合物1；4）将60%乙醇提取物的第三柱体积采用硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷‑丙酮进行梯度洗脱，得到2个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分4、组分5；组分4采用硅胶H常压柱色谱分离，先用二氯甲烷‑丙酮进行梯度洗脱，再用二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，得到2个亚组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为亚组分4.1、亚组分4.2；亚组分4.1经硅胶H柱色谱洗脱，薄层色谱检测、合并，浓缩、干燥，得到化合物2，亚组分4.2 经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱纯化，薄层色谱检测、合并，浓缩、干燥，得到化合物3；5）将洗脱的90%乙醇提取物的第一柱体积和第二柱体积合并在一起，采用硅胶H常压柱色谱分离，以二氯甲烷‑丙酮进行梯度洗脱，然后经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱纯化，薄层色谱检测、合并，浓缩、干燥，得到化合物4；化合物1~4即为促凝血苹果花有效成分。