[发明专利]一种水稻褐色菌核菌粗毒素鉴定方法

摘要

本发明属于植物病害预防技术领域，具体涉及一种水稻褐色菌核菌粗毒素鉴定方法。该方法包括菌株培养，提取水稻纹枯病菌粗毒素等步骤。本发明的创新点主要体现在首次对水稻褐色菌核病菌粗毒素进行了研究。在水稻褐色菌核病菌粗毒素提取及鉴定方面均首先提出了一系列简单有效的方法。结果表明，用该方法提取的水稻褐色菌核病菌粗毒素可引起水稻病斑产生，表明其具有生物活性。这为今后研究水稻褐色菌核病菌粗毒素提供了较为可靠简便的方法。同时，粗毒素组成成分的鉴定也为进一步研究其致病机理打下了坚实的基础，为今后植物抗病育种的研究提供了理论指导。

主权项

一种水稻褐色菌核菌粗毒素鉴定方法，其方法如下：1)菌种的转接及培养把保存于PDA固体斜面培养基上的水稻褐色菌核菌转接到PDA固体培养基上培养72h。把转接好的水稻褐色菌核菌挑2块菌丝接种到20mL液体PDA培养液中培养至长出大量菌丝又不产生褐色菌核。2)粗毒素的提取把获得的菌培养液进行过滤，滤液分别进行旋转蒸发，甲醇抽提，离心去沉淀后获得粗毒素。3)粗毒素的致病性鉴定取水稻品种为金刚30的水稻叶片，在叶片上用牙签刺形成伤口，粗毒素处理后观察病斑。4)粗毒素的组分鉴定将提取出的粗毒素溶于无水乙醚中，定容至1mL。提取物用气质联用仪进行结构分析。其质谱条件为：离子源为EI源，传输线温度：280℃；离子源温度：300℃；电子能量：70eV；扫描范围(m/z)：33‑800amu，采用全扫描采集模式。