[发明专利]一种罗汉果组培快繁工艺技术

摘要

本发明公开了一种罗汉果组培快繁工艺技术，罗汉果种子扁平圆形，淡黄色，边缘有槽。果实成熟后，用慢火烘干。广西有栽培，喜生于凉爽多雾的山坡向阳处。味甘，性凉。具有清热润肺，滑肠通便。本发明以罗汉果种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得了罗汉果离体再植株，建立罗汉果组织培养快速繁殖技术体系，为节约栽培生产中的用种量,提高其药材的产量及为罗汉果进一步开展遗传转化研究提供技术保证。

主权项

一种罗汉果组培快繁工艺技术，其特征在于包括以下步骤：（1）无菌苗的获得：选取饱满的罗汉果种子,在超净工作台中用手术剪刀剥去种皮，用75%酒精消毒20s，再用0.1%升汞溶液消毒5min，最后用无菌水漂洗1次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中，接种后每天光照28小时，光照强度为2300lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为75%的条件下培养15天后统计萌发率，所述的萌发培养基为：1/2MS+0.09mg/LNAA+12g/L蔗糖+3.0g/L琼脂，pH为5.2：（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.2cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养，接种后每天光照10小时，光照强度为2300lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为75%的条件下培养35天后统计诱导率，所述的愈伤诱导培养基为：MS+3.5mg/L6‑BA+0.8mg/LNAA+1.2mg/L KT+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.2：（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.2cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁，接种后每天光照10小时，光照强度为3300lx，培养温度为23℃，空气相对湿度为75%的条件下培养35天后统计增殖情况，所述的增殖培养基为：MS+2.5mg/L6‑BA+1.0mg/L NAA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.3：（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.2cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生，接种后每天光照18小时，光照强度为3300lx，培养温度为23℃，空气相对湿度为75%的条件下培养35天后统计分化情况，所述的分化培养基为：MS+1.5mg/LKT+2.5mg/LNAA+35g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.2：（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天光照15小时，光照强度为3200lx，培养温度为29℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后统计生根情况，所述的生根培养基为：1/2MS+1.2mg/LIBA+1.2mg/L NAA+1.2%活性炭+16g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.2：（6）炼苗移栽：生根一个月后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，10天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:2:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,18天将薄膜揭去,然后室外培养,隔天浇一次水,移栽35天后统计成活率。