[发明专利]利用DNA折纸结构构建级联反应的方法

摘要

本发明提出一种利用DNA折纸结构构建级联酶的体系，包括级联酶分别与DNA组装、两种管状DNA折纸形成、级联酶分别与两种DNA折纸组装和带有级联酶的两种DNA折纸组装，实现酶间距的精准调节。将级联酶分别与两种不同位点延伸的管状DNA折纸连接，随后管状DNA折纸进一步杂交，从而拉近两酶之间的距离，达到调控酶间距的目的。利用折纸的可寻址的优点，精确调控级联酶的间距。将两种酶分别组装在两个DNA折纸上，利用折纸延伸链的杂交将两个酶有序级联，提高级联的效率。

主权项

一种利用DNA折纸构建级联反应的方法，其特征在于，将级联酶分别与两种不同位点设计的管状DNA折纸连接，随后管状DNA折纸进一步杂交，包括下述步骤：（1）级联酶分别与DNA组装：将级联酶分别与连接剂3‑(2‑吡啶二巯基)丙酸N‑羟基琥珀酰亚胺酯（SPDP）以一定比例混合25℃孵育2hr后，超滤洗去过量的SPDP，随后SPDP修饰的两种酶的分别与巯基修饰的DNA 1、DNA2以一定比例均匀25℃孵育过夜，后采用超滤洗去过量的DNA，得到酶与DNA 的复合物Ⅰ和复合物Ⅱ；（2）两种管状DNA折纸形成：将替换链DNA分别与原有DNA订书钉链以等量的比例混合均匀，所得混合物随后以一定比例与所述的长链单链DNA在1×TAE‑Mg2+溶液体系中通过PCR退火，形成DNA折纸结构，形成的折纸结构采用超滤洗去过量订书钉链，分别得到折纸Ⅰ和折纸Ⅱ；（3）级联酶分别与两种DNA折纸组装：两种级联酶‑DNA复合物Ⅰ和复合物Ⅱ分别与两种管状DNA折纸Ⅰ和折纸Ⅱ以一定比例混合均匀，于45 ℃退火组装，分别得到级联酶‑折纸复合物Ⅲ和复合物Ⅳ，通过琼脂糖凝胶电泳分离除去未连接的酶与折纸，得到包含复合物Ⅲ和复合物Ⅳ的条带，采用过滤柱纯化回收级联酶‑折纸复合物Ⅲ和复合物Ⅳ；（4）带有级联酶的两种DNA折纸组装：将级联酶‑折纸复合物Ⅲ和复合物Ⅳ以一定比例混合均匀，于37℃退火组装，得到级联酶‑折纸终产物复合物Ⅴ。