[发明专利]一种农杆菌介导的针刺生长点转化小麦方法

摘要

本发明公开了一种农杆菌介导的针刺生长点转化小麦方法，步骤包括：⑴将小麦种子培养至胚芽鞘长0.5‑1cm；⑵将含有目的基因的农杆菌用YEB培养液振荡培养；⑶用注射器针头蘸取准备好的农杆菌针刺茎尖生长点的位置；⑷将针刺后的小麦外植体在25℃黑暗培养2天；⑸然后将小麦农杆菌侵染后的外植体转入蛭石营养土中，在温室中培养。用本发明的方法可以快速获得转基因小麦株系，可以培育出各种抗逆的小麦新种质。 1

主权项

1.一种农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：包括以下步骤：

⑴将消毒后的小麦种子在湿润的培养皿中培养至胚芽鞘长0.5‑1cm；

⑵将含有目的基因的农杆菌用YEB培养液振荡培养，当菌液OD600浓度为0.5时，加入200μM乙酰丁香酮，培养至OD600浓度为0.6时备用；

⑶用注射器针头蘸取准备好的农杆菌针刺茎尖生长点的位置；

⑷将针刺后的小麦外植体在25℃黑暗培养2天；

⑸然后将小麦农杆菌侵染后的外植体转入蛭石营养土中，在温室中培养。

2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：所述步骤⑴中小麦种子消毒的方法为：用95％酒精洗2min，然后用20％次氯酸钠处理10min，无菌水冲洗3次。

3.根据权利要求1所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：所述农杆菌的YEB培养液配方为胰蛋白胨10g/L,酵母提取物10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl2g/L，农杆菌培养温度为28℃。

4.根据权利要求1所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：所述含有目的基因的农杆菌是含有插入表达载体后的重组质粒，优选农杆菌菌株为EHA105、GV3101或AGL1。

5.根据权利要求4所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：所述农杆菌的表达载体为植物表达载体，优选pCAMBIA系列载体。

6.根据权利要求4所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：所述遗传转化的外植体为小麦种子萌发后时得到的茎尖，胚芽鞘大概0.5‑1cm，0.8cm。

7.根据权利要求4所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：步骤⑶所述的针刺生长点的位置的操作为：与胚芽鞘生长方向垂直，用5号注射器针头刺入生长点位置，操作前掰几个胚芽判断生长点的准确位置，大约1.5mm后迅速拔出。

8.根据权利要求4所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法，其特征在于：所述注射器针头为5号针头。

9.权利要求1‑7中任一所述的农杆菌介导的针刺生长点转化小麦的转基因方法在植物基因功能验证中的应用。

10.根据权利要求1‑7任一权利要求所述的小麦转基因方法，其特征在于：所述植物为栽培或野生小麦品种、品系、或育种材料。