[发明专利]一种同时检测环境水体中多种孕激素的方法

摘要

本发明公开了一种同时检测环境水体中多种孕激素的方法，属于环境中有机物分析领域，包括水样预处理、新型固相萃取吸附剂Oasis PRiME HLB富集浓缩、UPLC‑MS/MS测定孕激素浓度、标准曲线的绘制及上机测定五个步骤，采用新型固相萃取吸附剂Oasis PRiME HLB作为环境水样的预处理技术，既提高了对待测物的选择性，也大大增加了富集倍数和降低了基质效应，并且以超高液相‑质谱连用仪为检测定量工具，同时测定了水环境中11种不同孕激素，与普通的检测方式相比，实现了对孕激素的高选择性和高灵敏度的有效结合，且具有分析速度快、使用范围广等优点。

主权项

一种同时检测环境水体中多种孕激素的方法，其特征在于，将待测样品经过新型固相萃取吸附剂Oasis PRiME HLB预处理后，再用UPLC‑MS/MS检测，包括以下步骤：(1)水样预处理将采集的水样采用三种不同孔径的滤膜进行三级过滤，精确量取过滤后的水样0.2‑2L，并利用浓度为0.1mol/L盐酸和0.1mol/L氢氧化钠调节pH至7.0‑7.2；(2)新型固相萃取吸附剂Oasis PRiME HLB富集浓缩将步骤(1)处理过的水样直接过Oasis PRiME HLB固相萃取小柱进行富集，流速控制在7‑9mL/min，待富集结束后使用超纯水分两次淋洗所述固相萃取小柱，然后将淋洗后的固相萃取小柱在真空干燥箱中干燥1‑3h，干燥温度为25‑35℃，利用乙酸乙酯对干燥后的固相萃取小柱进行三次洗脱，得到含目标化合物的洗脱液，将所述洗脱液移至氮气吹干仪中，用流速为1.5‑2m/s的氮气吹扫30‑60min，得到残渣备用；(3)UPLC‑MS/MS测定孕激素浓度配制标准溶液：分别精确称取1mg所检测孕激素的标准品，并分别使用甲醇定容于100mL的容量瓶中，混合后得到10mg/L的混标储备溶液，于‑20℃冰箱中储存；配制工作溶液：精密量取甲醇溶液500μL溶解步骤(2)中的所述残渣，涡旋后，用玻璃滴管定容1mL并用0.22μm滤膜过滤，再用甲醇溶液进行稀释，得到不同浓度的工作溶液；色谱条件：色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18，2.1×100mm，1.7μm；流动相A为0.1％的甲酸，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱程序；流速为0.3mL/min；柱温为40℃，进样量为10μL；其中所述梯度洗脱程序如下所示：时间AB010900.5604036535670306.5100081090质谱条件：采用多反应检测模式，离子源为电喷雾离子化源(ESI源)，源温度为120℃，锥孔电压：30V，提取离子电压为2.5kV，毛细管电压为3kV，脱溶剂气温度为450℃，脱溶剂气流速为900L/hr；扫描时间为0.1s；(4)标准曲线的绘制以步骤(3)中所述混标储备溶液浓度(mg/L)为横坐标，响应值为纵坐标绘制孕激素的标准曲线；(5)上机测定将步骤(3)中所述的工作溶液使用UPLC‑MS/MS仪器检测，得到实际样品的典型色谱图，将所述实际样品典型色谱图与所述标准曲线进行比对进行定性检测；再使用UPLC‑MS/MS仪器的调谐功能，确定各个物质的母离子、子离子、碰撞电压和毛细电压，使用上述参数对工作溶液中的孕激素进行定量检测。