[发明专利]一种富硒酵母的制备方法

摘要

本发明涉及发酵工业技术领域，具体涉及一种富硒酵母的制备方法。本发明选用广西巴马县土壤样品，巴马土壤、谷物中的硒含量高于全国平均水平10倍以上，通过对土壤样品中酵母菌种筛选和育种，培养得到富硒的酵母菌菌种，对硒离子浓度、培养条件进行优化，提高了酵母菌硒含量的提高；本发明通过对富硒土壤中分离筛选得到的富硒酵母菌，通过用梯度浓度的亚硒酸钠的驯化，筛选抗硒能力高的酵母菌落，再进行紫外诱变，增强其富硒能力，得到获得生物量高、富硒能力强的酵母。

主权项

一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）将土样加入酵母菌液体培养基中，培养，得酵母培养液，取酵母培养液用质量分数为0.9%的生理盐水进行梯度稀释至10‑6稀释级，得稀释后酵母菌培养液，将酵母菌培养液涂布于酵母菌平板培养基上，培养，挑取菌径最大的酵母菌单菌落平板划线2~3次，得纯化后酵母菌单菌落；（2）挑取上述纯化后酵母菌单菌落接种至酵母菌液体培养基，活化培养，得酵母菌活化培养物，将亚硒酸钠按质量比1:1000加入驯化和筛选培养基混合，得一级驯化和筛选培养基，将酵母菌活化培养物接种至一级驯化和筛选培养基，培养，得一级驯化后酵母菌菌落，将亚硒酸钠按质量比1:500加入驯化和筛选培养基混合，得二级驯化和筛选培养基，挑取驯化酵母菌菌落接种至二级驯化和筛选培养基，培养，得二级酵母菌发酵液，将二级酵母菌发酵液用无菌水将其稀释至10‑3的稀释级，将亚硒酸钠按质量比1:300加入驯化和筛选培养基混合，得三级驯化和筛选培养基，将稀释后发酵液涂布于三级驯化和筛选培养基培养，得三级驯化后酵母菌菌落，将三级酵母菌培养物重复涂布培养3~4次，得硒抗性驯化后酵母菌菌落；（3）挑取硒抗性驯化后酵母菌菌落接种至酵母菌平板培养基中，活化培养，得活化酵母菌落，取无菌水洗涤活化酵母菌落，倒入盛有玻璃珠的容器中，振荡，并于摇床上震荡，得到单细胞菌悬液，用血球计数板计数，用无菌水将单细胞菌悬液调整至细胞浓度为10‑6~10‑7个/mL，紫外灯预热，取制备好的单细胞菌悬液置于无菌平皿内，置磁力搅拌器上搅拌，紫外灯照射，得处理的菌悬液，取处理的菌悬液0.1mL涂布于酵母菌平板培养基，培养，挑选出菌径最大的单菌落接种至种于发酵培养基中，培养，得紫外诱变后酵母菌培养液，干燥，得紫外诱变后酵母菌菌株；（4）将亚硒酸钠按质量比1:250加入发酵培养基混合，得富硒发酵培养基，驯化诱变后酵母菌菌株接种至富硒发酵培养基，培养，得驯化诱变酵母菌培养物，离心，取沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，再加入蒸馏水，离心，除上清液，此步骤反复2~3次，得到去培养液湿酵母，将湿酵母干燥，冷却，得富硒酵母粉。