[发明专利]裂果金花ITS序列提取及扩增方法在审
| 申请号： | 201711059326.1 | 申请日： | 2017-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN107881212A | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 张涛;谢培德;吴桂凡;黄莉莉;林雀跃;滕爱君;唐秀玲 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区食品药品检验所 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南宁市来来专利代理事务所(普通合伙)45118 | 代理人： | 来光业 |
| 地址： | 530021 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种裂果金花ITS序列提取及扩增方法，参考了《中国药典》2015年版第四部9107中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则，通过对裂果金花进行较为系统的DNA条形码研究，首次探索出了裂果金花干药材的DNA提取及扩增方法，可进一步了解裂果金花的微观构造，为玉叶金花属及裂果金花属植物的快速鉴定提供了依据。 | ||
| 搜索关键词： | 裂果 金花 its 序列 提取 扩增 方法 | ||
【主权项】：
裂果金花ITS序列提取及扩增方法，其特征在于，所述方法包括以下内容：（1）样品处理：取裂果金花干燥叶片，75%乙醇擦拭表面，晾干，取约30mg置2mL离心管中，加入钢珠，用球磨仪粉碎，备用；（2）DNA模板提取：使用TIANGEN 植物基因组DNA提取试剂盒方法提取；（3）DNA模板PCR扩增条件：1）体系：25 μL无菌双蒸水：17.3 μL DNTP ：2 μLBuffer（缓冲液）：2.5 μL ITS‑4引物：1 μLITS‑5引物：1 μL Taq酶：0.2 μL样品DNA模板：1 μL2）PCR程序：①94℃预变性5 min；②94℃变性45 sec；③56℃退火30 sec；④72℃延伸45 sec；⑤重复步骤②、③、④30次；⑥72℃延伸10 min；（4）ITS测序：得到扩增单一的ITS条带后送测序公司进行测序；（5）ITS序列拼接：利用CodonCode软件进行序列拼接，利用mega软件对拼接好的序列进行分析。
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