[发明专利]一种基于RT-qPCR法检测胃癌的试剂盒及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种基于RT‑qPCR法检测胃癌的试剂盒及其制备方法，属于分子生物学技术领域。所述试剂盒采用两个通用逆转录通用引物、一个通用qPCR反向通用引物和两个通用探针进行所有检测人类胃癌特异表达的miRNA的反应。实验证明，所述试剂盒具有检测特异性非常高：不仅能区别miRNAs和Pre‑miRNA、能区别miRNAs和genomic DNA，还能区别同一miRNA家族的不同成员，此外还能能区别miRNAs和其它RNAs。与传统qPCR相比，本发明使用通用逆转录通用引物，通用探针和通用qPCR反向通用引物实现所有人类胃癌特异表达的miRNA的检测，所述试剂盒具有检测范围广，检测灵敏度高的特点。

主权项

1.一种基于RT‑qPCR法检测胃癌的试剂盒，包括PCR板、qPCR正向引物、qPCR反向通用引物、探针、逆转录通用引物和内参miRNA，其特征在于，所述qPCR正向引物、qPCR反向通用引物和探针同时包被在PCR板中，所述逆转录通用引物盛装在引物试剂管中；所述内参miRNA包括ArtRNA3；所述ArtRNA3具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述逆转录通用引物包括两种；一种逆转录通用引物是摩尔浓度为10μmol/L的检测胃癌样品用逆转录通用引物，另一种逆转录通用引物是摩尔浓度为10μmol/L检测健康组织样品用逆转录通用引物；所述检测胃癌样品用逆转录通用引物具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；所述检测健康组织样品用逆转录通用引物具有如序列表中SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；所述探针包括两种探针，分别为摩尔浓度为10μmol/L的检测胃癌样品用通用探针和摩尔浓度为10μmol/L的检测健康组织样品用通用探针；所述检测胃癌样品用通用探针具有如序列表中SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；所述检测健康组织样品用通用探针具有如序列表中SEQ ID No.5所示的核苷酸序列；所述qPCR反向通用引物具有如序列表中SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；所述qPCR正向引物的核苷酸序列同差异表达miRNA的核苷酸序列；所述差异表达miRNA包括URS000054A671_9606Homo sapiens hsa‑miR‑5004‑5p、TJU_CMC_MD2.ID01366.5p‑miR、TJU_CMC_MD2.ID00936.5p‑miR、novel‑miR‑1373‑3p和TJU_CMC_MD2.ID00928.5p‑miR中的一个或多个。