[发明专利]一种检测结直肠癌中蛋白质组的方法

摘要

本发明涉及癌细胞转移方面的研究，具体是一种检测结直肠癌中蛋白质组的方法。本发明利用Transwell筛选高侵袭的肠癌细胞HCT116‑I8，并结合SILAC技术进行定量组学的蛋白质鉴定找到与细胞侵袭能力相关的蛋白质或通路。蛋白质组学技术可以从整体角度分析高侵袭能力的细胞内蛋白质的动态表达水平，可以全景式地检测蛋白质表达谱。利用高度侵袭肠癌模型和蛋白组学筛选侵袭相关功能蛋白这一技术发明能够高通量、高精度、高分辨率地检测在结直肠癌中不同侵袭能力的细胞中蛋白质组的变化，并可以发现与侵袭转移相关的潜在通路。利用这一技术可以高效率的探索癌症等疾病的发生机制，并提供可信度较高的药物作用靶点。

主权项

1.一种检测结直肠癌中蛋白质组的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用Transwell法筛选细胞；(2)用SILAC法标记细胞；(3)用超滤管酶解蛋白样品溶液；(4)质谱数据生物信息学分析；(5)生物信息学分析差异表达蛋白；其中，步骤(1)的详细步骤包括：(i)用1×PBS润洗细胞野生型HCT116和RKO细胞两次，用0.05％的胰酶消化并收集下来，离心去除上清，用无血清培养基1640重悬细胞；(ii)细胞计数，按照公式：按个/mL计，细胞密度＝(4个大格总数/4)×10⁴×稀释倍数；(iii)取20×10⁴个细胞加入Transwell实验装置的上室，用无血清DMEM培养基填补组间体积差异；(iv)在Transwell实验装置的下室加入600μL培养液；(v)置于37℃、5％CO₂细胞培养箱内孵育72h；(vi)迁移72h时，将穿过上室的细胞用胰酶消化下来，继续培养，细胞量达到20×10⁴后，重复步骤(i)，称为1轮；每轮过后，时间会逐渐缩短，下室含的血清的浓度逐渐减少；(vii)细胞筛选到第2～8轮后，做蛋白质的表型验证。