[发明专利]林可霉素的连续色谱分离纯化方法

摘要

本发明涉及一种林可霉素的连续色谱分离纯化方法，本发明利用连续色谱层析工艺实现林可霉素A组分的高效分离。本发明将生物发酵所得的林可霉素发酵滤液，进入连续色谱系统经吸附、洗杂、洗脱林可霉素、收集洗脱液及色谱柱再生，收集的洗脱液浓缩，再经成盐脱色得盐酸林可霉素。采用本法分离的林可霉素得率高，纯度高，成本低，环保，适合工业化生产。本发明具有生产工艺时间短、产品收率高，制备的最终产品中盐酸林可霉素(折干)的含量达到99％以上，解决了现有技术生产的盐酸林可霉素含量不高，且生产工艺时间长的缺点。

主权项

1.一种林可霉素的连续色谱分离纯化方法，其特征在于，步骤如下：步骤1，林可霉素发酵滤液上连续色谱柱，得到洗脱液；步骤2，洗脱液经过浓缩，结晶干燥得到林可霉素纯品；其中，步骤1所述上连续色谱柱，树脂选自：大孔吸附树脂HZ‑802、R‑802、蓝欣‑30、AB‑8、YPR‑Ⅱ树脂，树脂颗粒直径在50～100目，均匀度95％以上，其中，步骤2所述浓缩干燥，方法如下：浓缩采用减压浓缩，真空度为0.02～0.15Mpa，操作温度为35～90℃，浓缩至林可霉素质量浓度为25％～70％，得到浓缩液；浓缩液用丙酮结晶的方法得固体；采用圆盘传送式连续色谱分离或者模拟移动床式连续色谱分离，步骤如下：A、进料区(14‑17#)：该区域中进料分为两组平行进料，通过流速控制，原料首先进入14#口与15#口，在串联17#口与16#口，原料液经过树脂柱，产品被吸附在树脂上，检测14#柱出口料液与原料液一致，则判定为过饱和吸附，17#口与16#口出来的料液为中间料，进行套用进料，B、进料后水洗区(10‑13#)：该区域中的4个阀口以串联方式连接，位于吸附区后，树脂柱吸附饱和后，转动到洗料区，树脂柱内有过量的原料液，用水将柱子内剩余的料液与杂质B、C洗脱，洗脱下来的料液进入中间料进行套用进料，C、二次进料区(18‑20#)该区域的阀口为串联连接，由于吸附区过饱和吸附，洗料区也含有部分原料液，所以设置二次进料区，这样可以保证产品的完全吸附，增加产品收率，同时由于杂质B与林可霉素A在树脂上的吸附速度不一样，通过流速调整，可以将杂质B洗脱出来；D、产品解析区(7‑9#)在该区域内，采用串联连接方式，经过洗料区后，树脂柱内的杂质B、C已经很少，使用正丁醇将产品完成解析下来即可，该区域在柱子快要转动前一分钟，需要检测7#出口，确保7#出口不含有林可霉素A或含极少量林可霉素A，则代表产品完全解析，另检测产品周期样，确认解析下来的产品浓度与纯度，E、洗醇区(2‑6#)在该区域内，采用串联连接方式，由于正丁醇密度比水小，所以采用反进水清洗，这样清洗效果会比较好，减少清洗用水量，该区域在转动前1分钟，需要检测2#出口的洗水，检测是否含有丁醇，以判断洗醇区是否清洗干净，F、树脂下压区(1#)由于洗醇区采用反进水清洗方式，所以树脂会被顶上去，在1#柱使用水将树脂下压回落，可以保证下个周期进料的使用效果，使用大流量冲洗，将树脂柱清洗干净，该区域水可以反复使用，其中，杂质B为林可霉素B，其中，杂质C为含有林可霉素C、D、K、S及其他杂质的混合杂质。