[发明专利]一种大豆胰蛋白酶抑制剂的提取方法

摘要

本发明公开了一种大豆胰蛋白酶抑制剂的提取方法，其特征在于，包括以下步骤(1)制备提取大豆胰蛋白酶抑制剂初级上清液；(2)制备提取大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物；(3)对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物进行透析、纯化和洗脱后得到最终的大豆胰蛋白酶抑制剂。本发明通过对大豆浆液过滤、浸提并通过离心处理，能有效的确保大豆中的胰蛋白酶抑制剂分子不会流失；同时采用了分子的物理分离的方法来提取大豆胰蛋白酶抑制剂的粗提物，能更好的保护胰蛋白酶抑制剂分子不被破坏，有效的提高了大豆中胰蛋白酶抑制剂提供的质量，从而确保了胰蛋白酶抑制剂的质量、使用效果。

主权项

一种大豆胰蛋白酶抑制剂的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备大豆胰蛋白酶抑制剂初级上清液；该初级上清液的具体制备步骤为：(1.1)取干大豆加水浸泡过夜后磨碎并充分混匀成浆液；(1.2)将步骤(1.1)中得到的浆液搅拌后加入柠檬酸钠与磷酸三钠组成的混合溶液并用3层以上的纱布过滤，得到滤液和豆渣；(1.3)在步骤(1.2)得到的滤液中，以2‑5：1.5的比例添加柠檬酸钠和磷酸三钠，直至滤液PH值达到4.5～6.0，对添加柠檬酸钠和磷酸三钠后的滤液进行浸提并水浴，水浴后离心去除杂蛋白，得到初级上清液；(2)制备大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物；该大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的具体制备步骤为：(2.1)将初级上清液加热，并在上清液中添加硫酸铵，直至硫酸铵浓度30％，搅拌后得到次级搅拌液；(2.2)将次级搅拌液用滤纸过滤去脂，并将滤液静置过夜，即可得到粗提上清液；(2.3)在粗提上清液中加入硫酸铵，直至硫酸铵浓度50％，搅拌沉淀后得到大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物；(3)对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物进行透析、纯化和洗脱后得到最终的大豆胰蛋白酶抑制剂的制备步骤为：(3.1)将大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物热溶，并在该热溶后的粗提物中加入平衡液，搅拌过夜后得到透析液；(3.2)通过磷酸盐缓冲液和戊二醇以及磷酸缓冲液对透析液进行亲和层析住纯化，得到纯化液；(3.3)通过洗脱缓冲液对纯化液进行洗脱，并最终得到胰蛋白酶抑制剂。