[发明专利]一种基于双单抗夹心的磁酶免疫双重定量ELISA检测方法

摘要

本发明公开了一种基于双单抗夹心的磁酶免疫双重定量ELISA检测方法，用样品稀释液将目标蛋白A单克隆抗体包被的免疫磁珠稀释后，加入到目标蛋白B单克隆抗体包被的酶标板，磁性分离洗涤后，分别加入不同浓度梯度的目标蛋白A和目标蛋白B标准品混合液和待测血清样品，孵育及磁性分离洗涤后再加入HRP或ARP标记的目标蛋白A和目标蛋白B单克隆抗体混合液形成目标蛋白A双抗夹心复合物和目标蛋白B双抗夹心复合物，孵育后将目标蛋白A双抗夹心复合物转移至新的微孔板上，对目标蛋白A双抗夹心复合物进行磁性分离洗涤，对目标蛋白B双抗夹心复合物进行常规ELISA洗涤后，加入显色液，37℃避光显色，终止反应后上机检测并绘制标准曲线，根据标准曲线的线性关系即可计算待测血清样品中目标蛋白A和目标蛋白B的含量。

主权项

1.一种基于双单抗夹心的磁酶免疫双重定量ELISA检测方法，其特征是，用样品稀释液将目标蛋白A单克隆抗体包被的免疫磁珠稀释后，按100ul/孔加入到目标蛋白B单克隆抗体包被的酶标板，磁性分离洗涤后，分别加入不同浓度梯度的目标蛋白A和目标蛋白B标准品混合液和10倍梯度稀释的待测血清样品，37℃避光震荡孵育20min‑60min，磁性分离洗涤后再加入辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的目标蛋白A和目标蛋白B单克隆抗体混合液，从而形成以免疫磁珠为液相载体的目标蛋白A双抗夹心复合物和以酶标板为固相载体的目标蛋白B双抗夹心复合物，37℃避光震荡孵育20min‑60min，将以免疫磁珠为液相载体的目标蛋白A双抗夹心复合物转移至新的微孔板上，对目标蛋白A双抗夹心复合物进行磁性分离洗涤，对目标蛋白B双抗夹心复合物进行常规ELISA洗涤后，加入显色液，37℃避光显色1min‑20min，之后加入反应终止液终止反应，然后上机检测读取检测值，根据各浓度目标蛋白A和目标蛋白B标准品对应的检测值，进行线性拟合绘制标准曲线，根据标准曲线的线性关系即可计算待测血清样品中目标蛋白A和目标蛋白B的含量；所述目标蛋白A为AFP，所述目标蛋白B为GP73。