[发明专利]一种建立菜心悬浮细胞系的培养方法

摘要

本发明公开了一种建立菜心悬浮细胞系的培养方法，包括菜心无菌苗的培养、胚性愈伤组织的诱导和菜心悬浮细胞系的建立。本发明建立的菜心悬浮细胞系的培养方法，具有繁殖速度快，能在短期内提供大量均匀一致菜心悬浮细胞液的特点，为进一步利用基因工程等生物技术方法选育抗虫、抗逆、抗除草剂和其它优良性状的菜心新品种提供了新的途径和方法。

主权项

1.一种建立菜心悬浮细胞系的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.胚性愈伤组织的诱导：将无菌苗下胚轴外植体接入初代愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，所述初代愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+0.5～3 mg/L毒莠定+1 mg/L 6‑BA+30g/L蔗糖+3 g/L结冷胶，培养基pH为5.8；S2.将步骤S1获得的愈伤组织先后接入继代培养基A和继代培养基B中进行多次反复交替继代培养，所述继代培养基A的配方为：MS+1.5 mg/L毒莠定+1 mg/L 6‑BA+30 g/L蔗糖+3 g/L结冷胶+400 mg/L水解酪蛋白，培养基pH为5.8；所述继代培养基B的配方为：MS+1.5 mg/L毒莠定+1 mg/L 6‑BA+30g/L蔗糖+3 g/L结冷胶+400 mg/L水解酪蛋白+1 mg/L ABA；S3.菜心悬浮细胞系的建立：将步骤S2获得的胚性愈伤组织接入液体继代培养基C中进行继代培养，最终获得均匀的悬浮细胞液，所述液体继代培养基C的配方为：MS+1.5 mg/L毒莠定+1 mg/L 6‑BA+30 g/L蔗糖+400 mg/L水解酪蛋白，培养基pH为5.8。