[发明专利]一种登革病毒的PCR检测方法在审
| 申请号： | 201710546458.0 | 申请日： | 2017-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN107190105A | 公开（公告）日： | 2017-09-22 |
| 发明（设计）人： | 李凌云;王晓红;苏庆宁 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 深圳市顺天达专利商标代理有限公司44217 | 代理人： | 郭伟刚 |
| 地址： | 518000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及蚊虫感染登革病毒的极早期检测方法，该方法包括针对4种登革病毒毒株保守的5’‑UTR序列及基于保守序列的5’‑UTR SL primer的设计，以此特异性5’‑UTR SL primer的逆转录PCR；逆转录PCR扩增条件的设立优化；基于上述引物的实时荧光定量PCR引物的设计和方法建立。本发明的检测方法工艺简单高效、切实可行；设计的逆转录PCR引物、实时荧光定量PCR引物以及扩增条件具有高特异性、高灵敏度，可以在蚊虫感染登革病毒及越冬蚊虫虫卵、孑孓时期进行极早期检测，提供人群感染登革病毒危险性评估和极早期预警。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种登革病毒的PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、登革病毒RNA的提取纯化：匀浆破碎蚊虫虫体和/或孑孓虫体和/或虫卵，提取全部RNA分子，采取负向选择的方法去除宿主mRNA，纯化得到登革病毒RNA；S2、登革病毒RNA分子的逆转录：根据登革病毒不同毒株之间的共有序列，设计特异性逆转录PCR的茎环状引物，逆转录所述登革病毒RNA得到登革病毒的cDNA；S3、实时荧光PCR：根据所述共有序列和所述茎环状引物，设计实时荧光定量PCR引物，利用实时荧光PCR的方法定量检测登革病毒的浓度。
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