[发明专利]表达GPC3嵌合抗原受体的iNKT细胞及制备、应用

摘要

本发明公开了一种表达靶向GPC3嵌合抗原受体的iNKT细胞及其制备和应用。嵌合抗原受体为包含按串联结构域连接的识别GPC3的C末端表位的单链抗体GPC3‑ScFv、CD8的hinge区、跨膜区和胞内信号区。嵌合抗原受体修饰的iNKT细胞制备包括：构建嵌合抗原受体pRRL‑gc33‑28BBz，感染iNKT细胞，体外特异性扩增后获得针对GPC3靶向性的iNKT细胞。本发明中编码嵌合抗原受体蛋白的核酸，包括含核酸的质粒、含质粒的病毒以及病毒转导的转基因iNKT淋巴细胞可以有效地被用于肿瘤免疫治疗中。

主权项

1.编码抗GPC3嵌合抗原受体蛋白的核酸在制备表达GPC3嵌合抗原受体蛋白的iNKT细胞中的用途，制备过程包括以下步骤：以SEQ ID NO.1为模板，使用引物SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3扩增GPC3 scFV；使用引物SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7从iNKT细胞的cDNA中克隆CD8跨膜区和hinge区；使用引物SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11从iNKT细胞cDNA中克隆CD28跨膜区和胞内信号结构域；使用引物SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15从iNKT细胞cDNA中克隆CD3ζ信号结构域；使用引物SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13从iNKT细胞cDNA中克隆CD137胞内区域；将各部分通过连接酶连接到载体pRRL，构建得到pRRL‑CD8‑CD28‑4‑1BB‑CD3ζ；将GPC3 scFV克隆到pRRL‑CD8‑CD28‑4‑1BB‑CD3ζ，得到重组质粒pRRL‑GC33ScFv‑CD8‑CD28‑4‑1BB‑CD3ζ；包装成携带pRRL‑GC33ScFv‑CD8‑CD28‑4‑1BB‑CD3ζ编码基因的慢病毒；并利用该慢病毒感染iNKT细胞，使iNKT细胞表达该嵌合抗原受体。